1、免疫系統(tǒng)是人體自身的防御系統(tǒng)，可以識(shí)別和消滅外來(lái)侵入機(jī)體的任何異物，也可處理衰老、死亡等自身細(xì)胞。免疫低下是免疫系統(tǒng)失衡的直接表現(xiàn)，是機(jī)體的一種亞健康狀態(tài)，而乳酸菌及其相關(guān)制品具有增強(qiáng)機(jī)體免疫力等生理功能。本研究以分離自廣西巴馬長(zhǎng)壽人群腸道中的乳酸菌為研究對(duì)象，通過(guò)體外試驗(yàn)篩選出耐受性和黏附性較高的乳酸菌，以脾淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞為靶細(xì)胞從體外水平研究其對(duì)細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)活性，并通過(guò)小鼠免疫低下模型探討其在體內(nèi)對(duì)免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)效應(yīng)。主要研究結(jié)

2、果如下:
　　1.人源乳酸菌腸道耐受性及黏附能力體外研究。通過(guò)測(cè)定分離得到的乳酸菌在不同pH的人工胃液、人工腸液及不同膽鹽濃度培養(yǎng)基中的存活率以及對(duì)大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌的抑制能力來(lái)篩選耐受性及抑菌活性較強(qiáng)的乳酸菌，然后研究它們的表面疏水性、自聚合能力及黏附能力。結(jié)果表明，從樣品中分離得到119株菌株，將71株初步鑒定為乳酸菌，其中43株乳酸菌的凝乳特性良好、產(chǎn)酸速率中等、后酸化弱;21株乳酸菌在pH為2.0的人工胃液

3、和人工腸液培養(yǎng)3h存活率均大于20％，在膽鹽濃度為0.5％培養(yǎng)基中培養(yǎng)24h存活率大于10％;進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，共有12株高黏附性乳酸菌表面疏水性大于25％，自聚合百分率大于25％，每個(gè)細(xì)胞平均黏附菌數(shù)大于8個(gè);對(duì)表面疏水性、自聚合能力及黏附性進(jìn)行相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，表面疏水性與黏附性呈顯著正相關(guān)，自聚合能力與黏附性呈顯著正相關(guān)。
　　2.乳酸菌菌體對(duì)免疫細(xì)胞活性影響的體外研究。通過(guò)測(cè)定乳酸菌菌體外誘導(dǎo)免疫細(xì)胞增殖率、吞噬中性紅能力、分

4、泌IL-2、TNF-α及NO水平來(lái)研究其對(duì)免疫細(xì)胞活性的影響。結(jié)果表明，12株乳酸菌中對(duì)脾淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)增殖率均大于40％的菌株有LV108、PW1、RBM7和XJH301，其中菌株LV108對(duì)細(xì)胞誘導(dǎo)作用最強(qiáng);刺激脾淋巴細(xì)胞分泌IL-2含量均大于30.00ng/L的菌株有LV108、T2及XJH301;刺激脾淋巴細(xì)胞分泌TNF-α含量均大于34.40ng/L的菌株有LV108、N4、XJH301和W9。對(duì)巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)增殖率均大于40％的

5、菌株有LV108、N4、XJH301和Z9;菌株LV108、PW4和XJH301誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞吞噬中性紅能力與陽(yáng)性對(duì)照組沒有顯著性差異;刺激巨噬細(xì)胞分泌NO含量均大于6.80μmol/L的菌株有LV108、Q3和XJH301。通過(guò)研究乳酸菌菌體對(duì)免疫細(xì)胞活性的影響發(fā)現(xiàn)，菌株LV108和XJH301對(duì)免疫細(xì)胞刺激效果及分泌免疫活性物質(zhì)高于其它菌株，因而對(duì)這2株乳酸菌體內(nèi)免疫調(diào)節(jié)功能進(jìn)行進(jìn)一步研究。
　　3.乳酸菌分離株鑒定及耐藥性和益

6、生特性分析。通過(guò)測(cè)定乳酸菌對(duì)慶大霉素、阿米卡星、萬(wàn)古霉素等13種抗生素的藥敏性、對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和沙門氏菌三種致病菌的抑菌性及抗氧化能力來(lái)研究乳酸菌的體外功能特性。結(jié)果表明，菌株LV108和XJH301的耐藥譜相對(duì)較窄，均對(duì)新霉素、磺胺異惡唑及鏈霉素具有耐受性，均對(duì)頭孢哌酮及頭孢曲松中度敏感;均對(duì)阿米卡星、萬(wàn)古霉素、卡那霉素及紅霉素敏感。菌株LV108對(duì)3種致病菌抑菌圈直徑分別為21.40±1.53mm、17.50±1.24m

7、m及19.50±1.84mm;菌株XJH301對(duì)3種致病菌抑菌圈直徑分別為18.33±1.53mm、17.07±0.87mm及20.17±0.71mm。菌株LV108和XJH301發(fā)酵液對(duì)羥自由基清除率均大于53.00％;對(duì)DPPH自由基清除率均大于62.00％;還原能力均大于2.0。對(duì)篩選出的免疫調(diào)節(jié)性能較強(qiáng)、益生特性較好的菌株LV108和XJH301進(jìn)行API鑒定和16S rDNA序列鑒定發(fā)現(xiàn)，菌株LV108為鼠李糖乳桿菌（Lact

8、obacillus rhamnosus）、菌株XJH301為短雙歧桿菌（Bifidobacterium breve）。
　　4.乳酸菌對(duì)免疫低下小鼠免疫調(diào)節(jié)作用的研究。通過(guò)腹腔注射環(huán)磷酰胺來(lái)建立免疫低下小鼠模型，以左旋咪（硅）藥物為陽(yáng)性對(duì)照，研究乳酸菌菌懸液及其發(fā)酵乳對(duì)機(jī)體免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)效應(yīng)。對(duì)各組小鼠體重增長(zhǎng)速率、臟器指數(shù)、血清免疫分子分泌水平進(jìn)行了比較分析，同時(shí)對(duì)各組小鼠血清溶血素含量、耳腫脹度、脾淋巴細(xì)胞增值率（特異性免疫功

9、能指標(biāo)）以及巨噬細(xì)胞吞噬活性（非特異性免疫功能指標(biāo)）進(jìn)行了測(cè)定。結(jié)果表明，采用連續(xù)3天皮下注射80mg/kg的環(huán)磷酰胺方法成功的建立了免疫低下小鼠模型，干預(yù)組臟器指數(shù)、溶血素含量、耳腫脹度等指標(biāo)顯著高于模型組;通過(guò)乳酸菌干預(yù)4周后，發(fā)現(xiàn)LV108和XJH301菌懸液組及其發(fā)酵乳組小鼠體重增長(zhǎng)幅度顯著高于模型組;其血清IL-2含量分別為163.11ng/L、167.41ng/L、160.11 ng/L、166.18ng/L，其血清IgG含

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網(wǎng)址: 人源乳酸菌篩選及其對(duì)小鼠免疫調(diào)節(jié)作用的研究.pdf http://m.gysdgmq.cn/newsview883424.html