技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種以高濃度包含精氨酸、丙氨酸和/或苯丙氨酸作為有效成分的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑。

背景技術(shù)

伴隨飲食生活或生活方式的歐美化，肥胖人口正在增加。根據(jù)厚生勞動(dòng)省“國(guó)民健康、營(yíng)養(yǎng)調(diào)查結(jié)果的概要(2010)”，日本人的肥胖比例為男性30.4％、女性21.1％。進(jìn)而，相當(dāng)于推算達(dá)到2300萬(wàn)人的肥胖人口中的約一半的1100萬(wàn)人同時(shí)患有高血糖或高血脂、高血壓這樣的代謝綜合征(生活方式相關(guān)疾病)，使生活質(zhì)量(QOL)大大降低。在這些疾病的預(yù)防、改善中，不僅通過食物攝取的限制控制卡路里攝取，而且利用食品中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的生物體調(diào)節(jié)功能和運(yùn)動(dòng)引起的能量消耗，近年來都受到極大關(guān)注(非專利文獻(xiàn)1)。

近年來，氨基酸的功能性備受關(guān)注。例如，已知在攝取“VesPaAminoAcidMixture(V.A.A.M.)”后運(yùn)動(dòng)，血液中脂肪酶活性上升、血液中游離脂肪酸上升等，所述“VesPaAminoAcidMixture(V.A.A.M.)”是作為再現(xiàn)了由大胡蜂幼蟲分泌的唾液中的氨基酸組成的用作大胡蜂成蟲的能量來源的氨基酸組合物(專利文獻(xiàn)1～3及非專利文獻(xiàn)2)。另外，已知以特定的摩爾比包含丙氨酸、精氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、色氨酸、酪氨酸、纈氨酸及谷氨的氨基酸組合物，促進(jìn)在無(wú)氧運(yùn)動(dòng)過程中利用體脂肪用于運(yùn)動(dòng)能量生產(chǎn)的過程等(專利文獻(xiàn)4)。進(jìn)而，還已知包含具有胰島素分泌功能的氨基酸的組合物對(duì)運(yùn)動(dòng)等引起的體力的消耗時(shí)的耐力恢復(fù)或營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)給是有用的(專利文獻(xiàn)5)。此外，還已知包含一定量以上的精氨酸、谷氨酰胺及支鏈氨基酸的氨基酸組合物(專利文獻(xiàn)6)、或包含一定量以上的精氨酸及谷氨酰胺的嬰兒用體力增強(qiáng)劑及運(yùn)動(dòng)能力提高劑(專利文獻(xiàn)7)。

現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)

專利文獻(xiàn)

專利文獻(xiàn)1：日本特開平4-112825號(hào)公報(bào)

專利文獻(xiàn)2：日本特開平6-24977號(hào)公報(bào)

專利文獻(xiàn)3：日本特開平5-127258號(hào)公報(bào)

專利文獻(xiàn)4：日本特開2004-352696號(hào)公報(bào)

專利文獻(xiàn)5：日本特開昭61-215323號(hào)公報(bào)

專利文獻(xiàn)6：日本特開2005-27524號(hào)公報(bào)

專利文獻(xiàn)7：專利第4526047號(hào)公報(bào)

非專利文獻(xiàn)

非專利文獻(xiàn)1：河田照雄等編集、日本營(yíng)養(yǎng)·食料學(xué)會(huì)監(jiān)修“對(duì)肥胖和脂肪能量代謝-代謝綜合征的戰(zhàn)略－”、建帛社、PP.217-238(2008)

非專利文獻(xiàn)2：TsuchitaHetal、EffectsofaVesPaaminoacidmixtureidenticaltohornetlarvalsalivaonthebloodbiochemicalindicesofrunningrats.、NutrRes、17(6)、PP.999-1012(1997)

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明所要解決的課題

本發(fā)明的課題在于，提供一種能夠通過更有效地促進(jìn)脂質(zhì)代謝而有效地減少體脂肪的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑。

用于解決課題的技術(shù)方案

本發(fā)明人等對(duì)促進(jìn)脂肪的代謝、有效地減少體脂肪的物質(zhì)進(jìn)行了深入研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，以高濃度包含作為可以食用的主要氨基酸的精氨酸、苯丙氨酸及丙氨酸的氨基酸混合物具有高的脂質(zhì)代謝促進(jìn)作用及抗肥胖作用，從而完成了本發(fā)明。

具體而言，監(jiān)視施用腎上腺素的動(dòng)物的血液中甘油變化量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與現(xiàn)有的氨基酸組合物相比，以高濃度包含精氨酸、苯丙氨酸及丙氨酸的2個(gè)以上的組合的組合物顯著地促進(jìn)脂肪的分解。進(jìn)而，在飼喂高脂肪食物并施加運(yùn)動(dòng)負(fù)荷的動(dòng)物及施加運(yùn)動(dòng)負(fù)荷的人中，也可以確認(rèn)脂質(zhì)代謝促進(jìn)效果。

即，本發(fā)明包含以下的方面。

[1]一種脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑，所述脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑包含氨基酸混合物，所述氨基酸混合物包含選自由精氨酸、丙氨酸及苯丙氨酸構(gòu)成的組中的至少2種氨基酸，且所述脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑以相對(duì)于總氨基酸量100摩爾合計(jì)量計(jì)為60摩爾以上的摩爾比包含所述至少2種氨基酸。

[2]根據(jù)上述[1]所述的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑，其中，所述氨基酸混合物包含精氨酸、丙氨酸及苯丙氨酸。

[3]根據(jù)上述[1]或[2]所述的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑，其中，所述脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑以相對(duì)于總氨基酸量100摩爾，精氨酸：丙氨酸：苯丙氨酸＝8～30摩爾：18～30摩爾：10～20摩爾的摩爾比包含精氨酸、丙氨酸及苯丙氨酸。

[4]根據(jù)上述[1]～[3]中任一項(xiàng)所述的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑，其中，精氨酸、丙氨酸及苯丙氨酸的混合量至少滿足以下一個(gè)重量比：(i)精氨酸：丙氨酸＝1.5：1～1：1.5；(ii)丙氨酸：苯丙氨酸＝4：1～1：4；及(iii)精氨酸：苯丙氨酸＝1：1～1：4。

[5]根據(jù)上述[1]～[4]中任一項(xiàng)所述的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑，其中，所述脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑以相對(duì)于總氨基酸量100摩爾合計(jì)量計(jì)為100摩爾的摩爾比包含精氨酸、丙氨酸及苯丙氨酸。

[6]根據(jù)上述[1]～[4]中任一項(xiàng)所述的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑，其中，所述氨基酸混合物還包含甘氨酸，所述脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑以相對(duì)于總氨基酸量100摩爾合計(jì)量計(jì)為85摩爾以上的摩爾比包含精氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸及甘氨酸。

[7]根據(jù)上述[1]～[4]及[6]中任一項(xiàng)所述的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑，其中，所述氨基酸混合物還排他地包含脯氨酸、賴氨酸、酪氨酸、蘇氨酸、亮氨酸、纈氨酸、異亮氨酸、谷氨酸、色氨酸、組氨酸、絲氨酸、甲硫氨酸及天冬氨酸作為其它氨基酸。

[8]根據(jù)上述[7]所述的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑，其中，所述氨基酸混合物以相對(duì)于總氨基酸量100摩爾的下述摩爾比包含其它氨基酸：

脯氨酸0.01～4摩爾

賴氨酸0.01～2摩爾

酪氨酸0.01～2摩爾

蘇氨酸0.01～2摩爾

亮氨酸0.01～2摩爾

纈氨酸0.01～2摩爾

異亮氨酸0.01～2摩爾

谷氨酸0.01～1摩爾

色氨酸0.01～1摩爾

組氨酸0.01～1摩爾

絲氨酸0.01～1摩爾

甲硫氨酸0.01～0.2摩爾

天冬氨酸0.01～0.1摩爾。

[9]根據(jù)上述[1]～[8]中任一項(xiàng)所述的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑，所述脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑用于在腎上腺素分泌增加的狀態(tài)下起作用。

[10]根據(jù)上述[9]所述的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑，其中，腎上腺素分泌增加的狀態(tài)為受到運(yùn)動(dòng)、壓力、寒冷暴露、沐浴或多食引起的刺激的的狀態(tài)。

[11]根據(jù)上述[1]～[10]中任一項(xiàng)所述的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑，所述脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑用于促進(jìn)伴有選自由血液中甘油濃度上升、體重增加的抑制、血液中游離脂肪酸濃度上升、血液中胰高血糖素濃度上升、血液中皮質(zhì)醇濃度減少、血液中總酮體濃度上升、血液中3-羥基丁酸濃度上升及褐色脂肪組織中的UCP-1表達(dá)量增加構(gòu)成的組中的至少1個(gè)的脂質(zhì)代謝。

本發(fā)明進(jìn)而也包含以下的方面。

[a]一種脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑，所述脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑包含精氨酸、丙氨酸及苯丙氨酸作為有效成分，相對(duì)于所有氨基酸的摩爾數(shù)合計(jì)100摩爾，精氨酸、丙氨酸及苯丙氨酸的摩爾數(shù)合計(jì)為60摩爾以上；

[b]根據(jù)上述[a]所述的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑，所述脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑以精氨酸8～30摩爾、丙氨酸18～30摩爾、苯丙氨酸10～20摩爾的摩爾比包含這些氨基酸；

[c]根據(jù)上述[a]或[b]所述的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑，其中，相對(duì)于所有氨基酸的摩爾數(shù)合計(jì)100摩爾，精氨酸、丙氨酸及苯丙氨酸的摩爾數(shù)合計(jì)為100摩爾；

[d]一種脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑，所述脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑包含精氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸及甘氨酸作為有效成分，相對(duì)于所有氨基酸的摩爾數(shù)合計(jì)100摩爾，精氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸及甘氨酸的摩爾數(shù)合計(jì)為85摩爾以上；

[e]根據(jù)上述[d]所述的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑，所述脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑以精氨酸8～30摩爾、丙氨酸18～30摩爾、苯丙氨酸10～20摩爾、甘氨酸20～27摩爾的摩爾比包含這些氨基酸；

[f]根據(jù)上述[d]或[e]所述的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑，其中，相對(duì)于所有氨基酸的摩爾數(shù)合計(jì)100摩爾，精氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸及甘氨酸的摩爾數(shù)合計(jì)為100摩爾；

[g]根據(jù)上述[a]或[d]所述的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑，所述脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑還排他地包含脯氨酸、賴氨酸、酪氨酸、蘇氨酸、亮氨酸、纈氨酸、異亮氨酸、谷氨酸、色氨酸、組氨酸、絲氨酸、甲硫氨酸及天冬氨酸作為其它氨基酸；

[h]根據(jù)上述[b]或[e]所述的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑，所述脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑還排他地包含下述摩爾比的氨基酸作為其它氨基酸：

脯氨酸0.01～4摩爾

賴氨酸0.01～2摩爾

酪氨酸0.01～2摩爾

蘇氨酸0.01～2摩爾

亮氨酸0.01～2摩爾

纈氨酸0.01～2摩爾

異亮氨酸0.01～2摩爾

谷氨酸0.01～1摩爾

色氨酸0.01～1摩爾

組氨酸0.01～1摩爾

絲氨酸0.01～1摩爾

甲硫氨酸0.01～0.2摩爾

天冬氨酸0.01～0.1摩爾；

[i]根據(jù)上述[a]～[h]中任一項(xiàng)所述的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑，其特征在于，所述脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑在腎上腺素的分泌增加的狀態(tài)下攝取；

[j]根據(jù)上述[i]所述的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑，其中，腎上腺素的分泌增加的狀態(tài)為受到運(yùn)動(dòng)、壓力、寒冷暴露、沐浴或多食引起的刺激的狀態(tài)；

[k]根據(jù)上述[a]～[j]中任一項(xiàng)所述的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑，其特征在于，所述脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑增加褐色脂肪組織中的UCP-1的表達(dá)量；

[l]根據(jù)上述[a]～[j]中任一項(xiàng)所述的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑，其特征在于，所述脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑促進(jìn)從脂肪向脂肪酸的分解；

[m]根據(jù)上述[a]～[j]中任一項(xiàng)所述的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑，其特征在于，所述脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑促進(jìn)從脂肪酸向熱的轉(zhuǎn)化；

[n]根據(jù)上述[a]～[j]中任一項(xiàng)所述的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑，其特征在于，所述脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑促進(jìn)從脂肪酸向能量的轉(zhuǎn)化。

發(fā)明效果

本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑具有促進(jìn)脂質(zhì)代謝的效果，尤其是能夠在腎上腺素分泌增加的狀態(tài)下有效地呈現(xiàn)脂質(zhì)代謝促進(jìn)效果。

本說明書包含作為本申請(qǐng)的優(yōu)先權(quán)主張的基礎(chǔ)的日本國(guó)專利申請(qǐng)日本特愿2013-168690號(hào)的公開內(nèi)容。

附圖說明

圖1顯示了實(shí)施例1中獲得的血液中甘油濃度的變化率(甘油AUC變化率；相對(duì)于媒介物組的甘油AUC變化率(％))。

圖2顯示了實(shí)施例2中獲得的血液中甘油濃度的變化量(Δ甘油)的變化。#：P＜0.05(相對(duì)于媒介物組，F(xiàn)isher的PLSD檢驗(yàn))。

圖3顯示了實(shí)施例3中獲得的血液中甘油濃度的變化量(Δ甘油)的變化。表示平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差。*：P＜0.05(相對(duì)于媒介物組，F(xiàn)isher的PLSD檢驗(yàn))。

圖4顯示了實(shí)施例4中測(cè)定的體重的變化(圖4A)及測(cè)試期間中的采食量/體重(圖4B)。表示平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差。正常組：在第3天(day3)～第42天(day42)在體重上存在顯著差異。制備例3組：在第3天(day3)～第39天(day39)在體重上存在顯著差異。(相對(duì)于高脂肪組，P＜0.05，F(xiàn)isher的PLSD檢驗(yàn))。

圖5顯示了實(shí)施例4中測(cè)定的腎周圍的脂肪重量。表示平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差。*：P＜0.05(相對(duì)于高脂肪組，F(xiàn)isher的PLSD檢驗(yàn))。

圖6顯示了實(shí)施例4中測(cè)定的褐色脂肪組織中的UCP-1表達(dá)量。表示平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差。*：P＜0.05(相對(duì)于高脂肪組，F(xiàn)isher的PLSD檢驗(yàn))。

圖7顯示了實(shí)施例5中獲得的隨時(shí)間推移呼吸交換率的測(cè)定結(jié)果(圖7A)及呼吸交換率的變化量(Δ呼吸交換率)的結(jié)果(圖7B)。表示平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差。#：P＜0.05(相對(duì)于安慰劑組，單樣本t檢驗(yàn))。

圖8顯示了實(shí)施例5中獲得的血液中甘油濃度(圖8A)及血液中游離脂肪酸濃度(圖8B)隨時(shí)間推移的測(cè)定結(jié)果。表示平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差。

圖9顯示了實(shí)施例5中獲得的血液中皮質(zhì)醇濃度(圖9A)、血液中胰高血糖素濃度(圖9B)、血液中胰島素濃度(圖9C)及血糖(圖9D)隨時(shí)間推移的測(cè)定結(jié)果。表示平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差。#：P＜0.05、##：P＜0.01(相對(duì)于安慰劑組，單樣本t檢驗(yàn))。

圖10顯示了實(shí)施例5中獲得的血液中總酮體濃度(圖10A)、血液中3-羥基丁酸濃度(圖10B)及血液中乙酰乙酸濃度(圖10C)隨時(shí)間推移的測(cè)定結(jié)果。表示平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差。#：P＜0.05(相對(duì)于安慰劑組，單樣本t檢驗(yàn))。

圖11顯示了實(shí)施例5中獲得的血液中生長(zhǎng)激素濃度(圖11A)、血液中腎上腺素濃度(圖11B)及血液中去甲腎上腺素濃度(圖11C)隨時(shí)間推移的測(cè)定結(jié)果。表示平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差。

圖12顯示了實(shí)施例9中獲得的血液中胰高血糖素濃度的測(cè)定結(jié)果。*：P＜0.05(相對(duì)于高脂肪組，F(xiàn)isher的PLSD檢驗(yàn))。

圖13顯示了實(shí)施例9中獲得的肝臟中的肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶活性的測(cè)定結(jié)果。*：P＜0.05(相對(duì)于高脂肪組，F(xiàn)isher的PLSD檢驗(yàn))。

圖14顯示了實(shí)施例9中獲得的肝臟中的?；鵆oA氧化酶活性的測(cè)定結(jié)果。*：P＜0.05(相對(duì)于高脂肪組，F(xiàn)isher的PLSD檢驗(yàn))。

圖15顯示了實(shí)施例12中獲得的血液中甘油濃度的變化量(Δ甘油)。

圖16顯示了實(shí)施例13中獲得的血液中甘油AUC(min·mg/L)的測(cè)定結(jié)果。*：P＜0.05(相對(duì)于對(duì)照組，F(xiàn)isher的PLSD檢驗(yàn))。

圖17顯示了實(shí)施例14中獲得的血液中甘油AUC(min·mg/L)的測(cè)定結(jié)果。

具體實(shí)施方式

以下，詳細(xì)地說明本發(fā)明。但是，本發(fā)明并不限于以下的優(yōu)選的實(shí)施方式，本發(fā)明可以在發(fā)揮本發(fā)明的效果的范圍內(nèi)自由地變更。

本發(fā)明涉及一種脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑，所述脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑包含氨基酸混合物，所述氨基酸混合物包含選自由精氨酸、丙氨酸及苯丙氨酸構(gòu)成的組中的至少2種氨基酸，且所述脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑以相對(duì)于總氨基酸量100摩爾合計(jì)量計(jì)為60摩爾以上的摩爾比包含所述至少2種氨基酸。本發(fā)明還涉及一種脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑，所述脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑除選自由精氨酸、丙氨酸及苯丙氨酸構(gòu)成的組中的至少2種氨基酸之外，還包含甘氨酸作為氨基酸混合物的成分。本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑包含精氨酸、丙氨酸及苯丙氨酸；或精氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸及甘氨酸作為有效成分。

作為本發(fā)明的有效成分的精氨酸(Arginine)為一種非必需氨基酸，其中，存在D型和L型。L-精氨酸的CAS號(hào)為74-79-3，其別名為(S)-2-氨基-5-胍基戊酸、(S)-2-氨基-5-(脒基氨基)戊酸、L-(+)-精氨酸、精氨酸U。作為精氨酸，有時(shí)也使用縮寫Arg、R。精氨酸易溶于水或甲酸，溶于稀鹽酸，在乙醇中幾乎不溶(第十六改正日本藥局方)。已知在多種蛋白質(zhì)等各種各樣的物質(zhì)或食品例如肉類中包含精氨酸。盡管精氨酸作為尿素循環(huán)的中間體被生物合成，但其迅速地降解，因此，在兒童中被看作必需氨基酸。已知精氨酸促進(jìn)生長(zhǎng)激素的分泌，參與免疫功能的提高。

作為本發(fā)明的有效成分的丙氨酸(Alanine)為一種非必需氨基酸，其中，存在D型和L型。L-丙氨酸的CAS號(hào)為56-41-7，其別名為(S)-2-氨基丙酸、(2S)-2-氨基丙酸、α-丙氨酸、L-(+)-丙氨酸。作為丙氨酸，有時(shí)也使用縮寫Ala、A。丙氨酸易溶于水或甲酸，在乙醇中幾乎不溶(第十六改正日本藥局方)。已知在多種蛋白質(zhì)等各種各樣的物質(zhì)或食品中包含丙氨酸。已知丙氨酸為蛋白質(zhì)的組成氨基酸的一種，以及用于結(jié)締組織的物質(zhì)。

作為本發(fā)明的有效成分的苯丙氨酸(Phenylalanine)為一種必需氨基酸，其中，存在D型和L型。L-苯丙氨酸的CAS號(hào)為63-91-2，其別名為(S)-α-氨基苯丙酸、(2S)-2-氨基-3-苯基丙酸、(S)-3-苯基-2-氨基丙酸、L-β-苯基丙氨酸、L-(－)-苯基丙氨酸。作為苯丙氨酸，有時(shí)也使用縮寫Phe、F。苯丙氨酸易溶于甲酸，微溶于水，溶于稀鹽酸，在乙醇中幾乎不溶(第十六改正日本藥局方)。已知在多種蛋白質(zhì)等各種各樣的物質(zhì)或食品中包含苯丙氨酸。

甘氨酸(Glycine)為一種非必需氨基酸。甘氨酸的CAS號(hào)為56-40-6，其別名為2-氨基乙酸、α-氨基乙酸、Glycolixir、Glycocoll。作為甘氨酸，有時(shí)也使用縮寫Gly、G。甘氨酸易溶于水或甲酸，在乙醇中幾乎不溶(第十六改正日本藥局方)。已知在骨膠原、明膠、魚和貝類等各種各樣的物質(zhì)或食品中包含甘氨酸。已知甘氨酸具有糖原存儲(chǔ)特性，為血紅蛋白、肝臟中的酶等的構(gòu)成成分，為中樞神經(jīng)中的神經(jīng)遞質(zhì)。

在本發(fā)明中，精氨酸、苯丙氨酸、丙氨酸、甘氨酸或其它氨基酸可以為游離堿或水合物，另外，也可以與有機(jī)酸(乙酸、酒石酸、脂肪酸等)、有機(jī)堿、無(wú)機(jī)酸(鹽酸、氫溴酸、硝酸、硫酸、高氯酸等)、無(wú)機(jī)堿(鉀、鈉、鋅等)形成鹽。此外，精氨酸、苯丙氨酸、丙氨酸、甘氨酸可以使用D型和L型的任一種。

在本發(fā)明中，精氨酸、苯丙氨酸、丙氨酸、甘氨酸或其它氨基酸可以從富含精氨酸、苯丙氨酸、丙氨酸、甘氨酸或其它氨基酸的物質(zhì)或食品等中通過榨汁、濃縮、純化、結(jié)晶或利用各種溶劑提取等而獲得。作為各種溶劑，可以將水或通常所使用的溶劑、例如醇類、烴類、有機(jī)酸、有機(jī)堿、無(wú)機(jī)酸、無(wú)機(jī)堿、超臨界流體等單獨(dú)使用、或?qū)⑵涠鄠€(gè)組合使用。另外，也可以使用由微生物生產(chǎn)的物質(zhì)。此外，也可以使用化學(xué)上合成的物質(zhì)。在本發(fā)明中，精氨酸、苯丙氨酸、丙氨酸、甘氨酸或其它氨基酸可以組合使用上述多種方式由來的物質(zhì)。

本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑包含選自由精氨酸、丙氨酸及苯丙氨酸構(gòu)成的組中的至少2種氨基酸的組合，例如精氨酸、丙氨酸及苯丙氨酸作為有效成分。本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑可以以相對(duì)于所包含的所有氨基酸的摩爾數(shù)合計(jì)(總氨基酸量)100摩爾，精氨酸、丙氨酸及苯丙氨酸的摩爾數(shù)合計(jì)為60摩爾以上、70摩爾以上、80摩爾以上、90摩爾以上、或100摩爾的摩爾比的量包含選自由精氨酸、丙氨酸及苯丙氨酸構(gòu)成的組中的至少2種氨基酸。在一個(gè)實(shí)施方式中，在本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑中，相對(duì)于所包含的所有氨基酸的摩爾數(shù)合計(jì)(總氨基酸量)100摩爾，精氨酸、丙氨酸及苯丙氨酸的合計(jì)量可以為95摩爾以下、90摩爾以下、80摩爾以下、或75摩爾以下的摩爾比的量。予以說明的是，“相對(duì)于所包含的所有氨基酸的摩爾數(shù)合計(jì)(總氨基酸量)100摩爾，精氨酸、丙氨酸及苯丙氨酸的摩爾數(shù)合計(jì)為100摩爾的摩爾比”是指：該脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑中所包含的氨基酸僅為精氨酸、丙氨酸及苯丙氨酸，即該脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑中所包含的氨基酸混合物由精氨酸、丙氨酸及苯丙氨酸構(gòu)成，本說明書中的其它類似的記載也同樣地被理解。作為這種脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑的組成的實(shí)例，可以列舉表2及表3所示的構(gòu)成的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑(制備例1、制備例2、制備例3)，但并不限于這些實(shí)例。

另外，對(duì)應(yīng)于本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑中所包含的精氨酸、丙氨酸及苯丙氨酸的各自的混合量的摩爾比可以為任一值。硬要舉例的話，本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑可以以相對(duì)于其中所包含的總氨基酸量100摩爾，精氨酸8～30摩爾、丙氨酸18～30摩爾、苯丙氨酸10～20摩爾的摩爾比包含這些氨基酸。在更優(yōu)選的一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑可以以相對(duì)于其中所包含的總氨基酸量100摩爾，精氨酸25～30摩爾、丙氨酸25～30摩爾、苯丙氨酸10～15摩爾的摩爾比包含這些氨基酸?？蛇x地，在優(yōu)選的其它實(shí)施方式中，本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑可以以相對(duì)于其中所包含的總氨基酸量100摩爾，精氨酸8～50摩爾、丙氨酸18～50摩爾、苯丙氨酸10～70摩爾的摩爾比包含這些氨基酸。例如，在本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑包含精氨酸、丙氨酸及苯丙氨酸，且相對(duì)于本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑中所包含的總氨基酸量100摩爾，它們的合計(jì)量等于100摩爾的摩爾比的情況(即所包含的氨基酸僅由精氨酸、丙氨酸及苯丙氨酸構(gòu)成的情況)下，可以使本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑以相對(duì)于其中所包含的總氨基酸量100摩爾，精氨酸8～50摩爾、丙氨酸18～50摩爾、苯丙氨酸10～70摩爾的摩爾比包含這些氨基酸。本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑另外可以以相對(duì)于其中所包含的總氨基酸量100摩爾，精氨酸8～30摩爾、丙氨酸20～35摩爾、苯丙氨酸10～55摩爾的摩爾比包含這些氨基酸。

本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑中的精氨酸、丙氨酸及苯丙氨酸的混合量并不限于以下，優(yōu)選至少滿足以下一個(gè)重量比：(i)精氨酸：丙氨酸＝3：1～1：3，更優(yōu)選1.5：1～1：1.5，例如1：1；(ii)丙氨酸：苯丙氨酸＝7：1～1：7，更優(yōu)選4：1～1：4，例如1：3；及(iii)精氨酸：苯丙氨酸＝7：1～1：7，更優(yōu)選1：1～1：4，例如1：3。本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑可以相對(duì)地包含較多苯丙氨酸。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑中的精氨酸、丙氨酸及苯丙氨酸的混合量可以滿足但并不限于以下：精氨酸：丙氨酸：苯丙氨酸＝1：1：1～1：1：10、更優(yōu)選1：1：1～1：1：6、例如1：1：1～1：1：3的重量比。在另一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑中的精氨酸、丙氨酸及苯丙氨酸的混合量可以滿足但并不限于以下：精氨酸：丙氨酸：苯丙氨酸＝2～4：1～2：1～2、例如2～3：1～1.5：1的重量比。

本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑除了選自由精氨酸、丙氨酸及苯丙氨酸構(gòu)成的組中的至少2種氨基酸之外，還可以包含甘氨酸作為有效成分，例如也可以包含精氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸及甘氨酸作為有效成分。本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑可以以相對(duì)于所包含的所有氨基酸的摩爾數(shù)合計(jì)(總氨基酸量)100摩爾，精氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸及甘氨酸的摩爾數(shù)合計(jì)為85摩爾以上、90摩爾以上、95摩爾以上、或100摩爾的摩爾比的量包含選自由精氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸構(gòu)成的組中的至少2種氨基酸及甘氨酸。在一個(gè)實(shí)施方式中，在本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑中，相對(duì)于包含的所有氨基酸的摩爾數(shù)合計(jì)(總氨基酸量)100摩爾，精氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸及甘氨酸的合計(jì)量可以為99摩爾以下、95摩爾以下、92摩爾以下、或90摩爾以下的摩爾比的量。

另外，對(duì)應(yīng)于本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑中所包含的精氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸及甘氨酸的各自的混合量的摩爾比可以為任一值。硬要舉例的話，本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑可以以相對(duì)于其中所包含的總氨基酸量100摩爾，精氨酸8～30摩爾、丙氨酸18～30摩爾、苯丙氨酸10～20摩爾、甘氨酸20～27摩爾的摩爾比包含這些氨基酸。本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑例如可以以相對(duì)于其中所包含的總氨基酸量100摩爾，精氨酸25～30摩爾、丙氨酸25～30摩爾、苯丙氨酸10～15摩爾、甘氨酸22～27摩爾的摩爾比包含這些氨基酸。

作為本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑的組成實(shí)例，可以列舉具有表3所示的構(gòu)成的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑(制備例3)，但并不限于該實(shí)例。由于精氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸及甘氨酸的味道和氣味適于食用、飲用或經(jīng)口攝取，因此，以高濃度包含這些物質(zhì)的本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑，其風(fēng)味優(yōu)異。因此，本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑具有不損害添加該脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑的食品、飲品或藥品的風(fēng)味的優(yōu)點(diǎn)。

此外，本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑還可以包含其它氨基酸。其它氨基酸可以為通常構(gòu)成生物體的蛋白質(zhì)的20種氨基酸。其它氨基酸可以為天然氨基酸，也可以為非天然氨基酸。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑還可以排他地包含脯氨酸、賴氨酸、酪氨酸、蘇氨酸、亮氨酸、纈氨酸、異亮氨酸、谷氨酸、色氨酸、組氨酸、絲氨酸、甲硫氨酸及天冬氨酸作為其它氨基酸。作為其它氨基酸，可以優(yōu)先使用不阻礙本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑的脂質(zhì)代謝促進(jìn)效果的氨基酸。

另外，對(duì)應(yīng)于本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑中所包含的其它氨基酸的各自的混合量的摩爾比可以為任一值。硬要舉例的話，本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑可以以相對(duì)于其中所包含的總氨基酸量100摩爾，脯氨酸0.01～4摩爾、賴氨酸0.01～2摩爾、酪氨酸0.01～2摩爾、蘇氨酸0.01～2摩爾、亮氨酸0.01～2摩爾、纈氨酸0.01～2摩爾、異亮氨酸0.01～2摩爾、谷氨酸0.01～1摩爾、色氨酸0.01～1摩爾、組氨酸0.01～1摩爾、絲氨酸0.01～1摩爾、甲硫氨酸0.01～0.2摩爾、天冬氨酸0.01～0.1摩爾的摩爾比包含這些氨基酸。

在本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑的更優(yōu)選的實(shí)例中，可以以精氨酸25～30摩爾、丙氨酸25～30摩爾、苯丙氨酸10～15摩爾、甘氨酸22～27摩爾、脯氨酸0.1～4摩爾、賴氨酸0.1～2摩爾、酪氨酸0.1～2摩爾、蘇氨酸0.1～2摩爾、亮氨酸0.1～2摩爾、纈氨酸0.1～2摩爾、異亮氨酸0.1～2摩爾、谷氨酸0.1～1摩爾、色氨酸0.1～1摩爾、組氨酸0.1～1摩爾、絲氨酸0.1～1摩爾、甲硫氨酸0.01～0.2摩爾、天冬氨酸0.01～0.1摩爾的摩爾比包含這些氨基酸。在本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑的進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)例中，可以以精氨酸27～30摩爾、丙氨酸25～28摩爾、苯丙氨酸10～13摩爾、甘氨酸23～26摩爾、脯氨酸2～3摩爾、賴氨酸0.6～1.6摩爾、酪氨酸0.1～1.1摩爾、蘇氨酸0.5～1.5摩爾、亮氨酸0.3～1.3摩爾、纈氨酸0.3～1.3摩爾、異亮氨酸0.1～2.1摩爾、谷氨酸0.1～1摩爾、色氨酸0.1～0.5摩爾、組氨酸0.1～0.6摩爾、絲氨酸0.1～0.6摩爾、甲硫氨酸0.01～0.15摩爾、天冬氨酸0.01～0.05摩爾的摩爾比包含這些氨基酸。

本發(fā)明中所說的“脂肪”是指中性脂肪。中性脂肪的分解代謝分為中性脂肪向甘油和脂肪酸的分解以及脂肪酸的燃燒(β氧化)。脂肪的分解機(jī)制一般而言可以如下地概括。

(1)因運(yùn)動(dòng)負(fù)荷、沐浴、寒冷刺激等而引起的腎上腺素的分泌增加。

(2)當(dāng)腎上腺素與脂肪細(xì)胞膜上的β受體結(jié)合時(shí)，存在于細(xì)胞膜內(nèi)表面的腺苷酸環(huán)化酶被活化，由ATP合成環(huán)AMP(cAMP)。

(3)由于細(xì)胞內(nèi)cAMP濃度增加，cAMP依賴性的蛋白激酶A被活化，利用該蛋白激酶A，脂肪細(xì)胞中的激素敏感性脂肪酶被磷酸化并活化。

(4)激素敏感性脂肪酶將三酰甘油轉(zhuǎn)化為游離脂肪酸和單酰甘油。

(5)單酰甘油脂肪酶將單酰甘油轉(zhuǎn)化為甘油和游離脂肪酸。

所產(chǎn)生的脂肪酸的燃燒(β氧化)一般而言如下地概括。

(1)脂肪酸被遞送至肝臟，利用存在于線粒體外膜的細(xì)胞質(zhì)側(cè)的酶?；鵆oA合成酶被催化并活化，轉(zhuǎn)化為脂酰CoA。

(2)產(chǎn)生的脂酰CoA被遞送至線粒體內(nèi)膜。

(3)由于線粒體內(nèi)膜不允許?；鵆oA直接通過，因此，與肉堿暫時(shí)地結(jié)合，產(chǎn)生脂肪酸?；鈮A。脂肪酸酰基肉堿由于促進(jìn)的經(jīng)由?；鈮A/肉堿轉(zhuǎn)運(yùn)體的擴(kuò)散而通過線粒體內(nèi)膜，轉(zhuǎn)移至基質(zhì)內(nèi)。隨后，利用酶肉堿?；D(zhuǎn)移酶II，從肉堿催化轉(zhuǎn)移至存在于線粒體內(nèi)的輔酶A，由此再生脂酰CoA。

(4)進(jìn)入線粒體內(nèi)的脂酰CoA通過基質(zhì)內(nèi)的酶進(jìn)行氧化。β氧化反應(yīng)由重復(fù)的4階段的反應(yīng)的循環(huán)構(gòu)成，每個(gè)循環(huán)中，2個(gè)碳原子從脂肪酸酰基鏈的羧基末端作為乙酰基CoA進(jìn)行分離。由于通過脫氫酶引起的α位和β位的不飽和化、通過水合酶引起的β位的OH加成，β位利用脫氫酶與酮基結(jié)合，且CoA利用硫解酶與β位結(jié)合，α位和β位被切斷，產(chǎn)生短碳鏈脂肪酸酰基-CoA和乙?；鵆oA。

(5)一部分乙?；鵆oA轉(zhuǎn)化為乙酰乙酰CoA，經(jīng)過3-羥基3-甲基戊二酰CoA(HMG-CoA)而產(chǎn)生乙酰乙酸。乙酰乙酸通過脫羧反應(yīng)而轉(zhuǎn)化為丙酮，或通過還原而轉(zhuǎn)化為β羥基丁酸。

(6)在肝臟中產(chǎn)生的乙酰乙酸·β羥基丁酸被遞送至肝臟以外的組織(中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心肌、骨骼肌、腎、腎上腺等)的細(xì)胞，在線粒體的TCA循環(huán)和電子傳遞系統(tǒng)中被用于ATP產(chǎn)生。

進(jìn)而，脂肪酸在褐色脂肪細(xì)胞內(nèi)被分解，受到UCP-1(解偶聯(lián)蛋白1；線粒體解偶聯(lián)蛋白)的作用而轉(zhuǎn)化為熱。更具體而言，當(dāng)去甲腎上腺素與褐色脂肪上的β3受體結(jié)合時(shí)，UCP-1(也被稱為增溫素)打開，膜電位(線粒體的質(zhì)子濃度梯度)被解除，不進(jìn)行ATP合成，另一方面，脂肪酸等基質(zhì)的氧化顯著地增加而產(chǎn)生熱量。即，促進(jìn)脂肪酸的β氧化，放出熱能。另外，在體內(nèi)來自葡萄糖的能量的代謝不足時(shí)，游離脂肪酸主要在肝臟的線粒體內(nèi)轉(zhuǎn)化為酮體(乙酰乙酸、β-羥基丁酸、丙酮)，作為能量源進(jìn)行代謝。

在后述的實(shí)驗(yàn)性實(shí)施例(實(shí)施例2、實(shí)施例3及實(shí)施例10)中，得知：通過使用經(jīng)由施用腎上腺素而人為地增加腎上腺素分泌的動(dòng)物，監(jiān)視血液中甘油變化量，發(fā)現(xiàn)與現(xiàn)有的氨基酸組合物相比，以高濃度包含精氨酸、苯丙氨酸、丙氨酸及甘氨酸的本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑或組合了精氨酸、苯丙氨酸及丙氨酸中的2種以上的本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑促進(jìn)脂質(zhì)代謝。

進(jìn)而，可以使用飼喂高脂肪食物的動(dòng)物或人，在實(shí)際上給予運(yùn)動(dòng)負(fù)荷而腎上腺素分泌增加的狀態(tài)下確認(rèn)本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑的脂質(zhì)代謝促進(jìn)效果(實(shí)施例4、實(shí)施例5)。

即，本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑能夠更有效地代謝脂肪，特別是能夠在腎上腺素的分泌連續(xù)增加的狀態(tài)下更有效地代謝脂肪。本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑可以用于在受試者中在腎上腺素分泌增加的狀態(tài)下起作用而優(yōu)選使用。腎上腺素分泌增加的狀態(tài)沒有特別限定，優(yōu)選為受到運(yùn)動(dòng)、壓力、寒冷暴露、沐浴或多食等引起的刺激的狀態(tài)。為了使本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑在受試者中在腎上腺素分泌增加的狀態(tài)下起作用，只要將本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑施用于處于腎上腺素分泌增加的狀態(tài)的受試者、或?qū)︻A(yù)期處于腎上腺素分泌增加的狀態(tài)的受試者(例如運(yùn)動(dòng)前的受試者)施用即可。

如實(shí)施例4所示，在施用本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑的動(dòng)物中，褐色脂肪組織中的UCP-1的表達(dá)量增加。由此得知：本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑提高脂肪的分解，同時(shí)提高從脂肪酸向熱的轉(zhuǎn)化效率。

另外，如實(shí)施例5所示，在施用本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑的人中，運(yùn)動(dòng)時(shí)的酮體產(chǎn)生且胰高血糖素的分泌升高。胰高血糖素具有促進(jìn)糖原的利用、同時(shí)促進(jìn)酮體的產(chǎn)生的作用。由此也得知：本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑在來自葡萄糖的能量的代謝不足時(shí)提高從脂肪酸向能量的轉(zhuǎn)化的效率。關(guān)注于酮體濃度隨時(shí)間推移的變化時(shí)，在進(jìn)行運(yùn)動(dòng)負(fù)荷之后(time30～time90)，酮體的產(chǎn)生大大提高。由此得知：在運(yùn)動(dòng)中增加的脂肪酸向能量的轉(zhuǎn)化在運(yùn)動(dòng)結(jié)束后也繼續(xù)維持高的狀態(tài)。

此外，在施用本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑的人中，有氧運(yùn)動(dòng)時(shí)的呼吸交換率的變化量降低。呼吸交換率為能量代謝的指標(biāo)之一，該值降低表示能量代謝中的脂質(zhì)的貢獻(xiàn)升高。由此也得知：本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑提高了從脂肪酸向能量變換的效率(實(shí)施例5)。

皮質(zhì)醇為糖質(zhì)腎上腺皮質(zhì)激素的一種，為受到壓力時(shí)從腎上腺皮質(zhì)的分泌增加的激素。皮質(zhì)醇的上升具有促進(jìn)從糖原或蛋白質(zhì)向糖的分解的作用，因此，其上升使脂質(zhì)代謝增加。但是，當(dāng)皮質(zhì)醇的分泌狀態(tài)持續(xù)高時(shí)，將肌糖原和肝糖原在早期消耗，運(yùn)動(dòng)表現(xiàn)降低。進(jìn)而，伴有免疫功能的降低和肌肉及臟器的萎縮這樣的對(duì)身體的不良影響。因此，優(yōu)選皮質(zhì)醇的水平在運(yùn)動(dòng)早期返回到正常值。在攝取了本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑的人(活性組)中，血液中的皮質(zhì)醇從攝取之后(time0)上升，但從攝取15分鐘后(time15)迅速地下降，其速度比安慰劑組快。由此得知：通過攝取本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑，即使給予相同的運(yùn)動(dòng)負(fù)荷，也可進(jìn)行運(yùn)動(dòng)而不會(huì)對(duì)身體進(jìn)一步施加負(fù)擔(dān)(實(shí)施例5)。

另一方面，在施用本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑的人中，在血液中的胰島素濃度和血糖方面沒有觀察到變化。因此得知：本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑在不會(huì)影響胰島素的分泌或血糖的情況下促進(jìn)脂質(zhì)代謝(實(shí)施例5)。在胰島素的分泌增加的狀態(tài)下進(jìn)行運(yùn)動(dòng)時(shí)，有時(shí)在運(yùn)動(dòng)時(shí)中會(huì)產(chǎn)生低血糖。由于本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑對(duì)胰島素的分泌不產(chǎn)生影響，因此，可以有效地產(chǎn)生來自脂質(zhì)的能量，而不會(huì)在運(yùn)動(dòng)時(shí)導(dǎo)致低血糖。

另外還得知：本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑起到脂質(zhì)代謝促進(jìn)效果，而不會(huì)對(duì)生長(zhǎng)激素、腎上腺素及去甲腎上腺素的分泌產(chǎn)生影響(實(shí)施例5)。

由上述結(jié)果得知：本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑還促進(jìn)從脂肪向脂肪酸的分解、從脂肪酸向熱的轉(zhuǎn)化及從脂肪酸向能量的轉(zhuǎn)化的任一過程。

因此，本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑可以用于促進(jìn)脂肪向脂肪酸的分解及從脂肪酸向熱的轉(zhuǎn)化這兩個(gè)方面。本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑可以用于促進(jìn)伴有選自由血液中甘油濃度上升、體重增加的抑制、血液中游離脂肪酸濃度上升、血液中胰高血糖素濃度上升、血液中皮質(zhì)醇濃度減少、血液中總酮體濃度上升、血液中3-羥基丁酸濃度上升及褐色脂肪組織中的UCP-1表達(dá)量增加構(gòu)成的組中的至少1個(gè)、優(yōu)選2個(gè)以上、更優(yōu)選其全部的作為這些脂質(zhì)代謝的指標(biāo)的脂質(zhì)代謝。本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑還可以用于促進(jìn)伴有肝臟中肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶活性上升和/或肝臟中的?；鵆oA氧化酶活性上升作為另外的指標(biāo)的脂質(zhì)代謝。這些指標(biāo)可以利用常規(guī)方法進(jìn)行測(cè)定，例如可以參照后述的實(shí)施例的記載進(jìn)行測(cè)定。予以說明的是，這些脂質(zhì)代謝的指標(biāo)的上升、減少或增加等與除了不施用或攝取本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑之外同樣的條件的對(duì)照組(例如安慰劑組)進(jìn)行比較而判斷即可，如果顯示一定的傾向，則可以判斷為具有這些效果，但更優(yōu)選顯示統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的差異。

本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑還可以直接地或以添加于用于促進(jìn)脂質(zhì)代謝的食品、飲品或藥品等任一種方式利用。

在本發(fā)明中，精氨酸、丙氨酸及苯丙氨酸在脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑中的混合量沒有特別限定，可因劑型、癥狀、體重、用途等而不同，硬要舉例的話，可以設(shè)定為以精氨酸、丙氨酸及苯丙氨酸的合計(jì)計(jì)為0.2～100w/w％(重量/重量％)的混合量，優(yōu)選0.3～100w/w％的混合量、進(jìn)一步優(yōu)選0.4～100w/w％的混合量。

本發(fā)明另外還提供一種促進(jìn)受試者的脂質(zhì)代謝的方法，所述方法包括對(duì)受試者施用或使受試者攝取本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑。作為受試者，優(yōu)選期望促進(jìn)脂質(zhì)代謝的動(dòng)物，其優(yōu)選的示例包括但不限于哺乳動(dòng)物包括人、家畜(豬、牛等)、寵物(狗、貓等)、實(shí)驗(yàn)(測(cè)試)動(dòng)物(小鼠、大鼠等嚙齒動(dòng)物或兔等)。作為優(yōu)選的受試者的實(shí)例，可列舉：脂質(zhì)代謝異?；蚍逝职Y的受試者，具有肥胖的遺傳傾向、具有肥胖的生活習(xí)慣風(fēng)險(xiǎn)或環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)的受試者，期望體重降低或體重維持的受試者，或置于或預(yù)期置于起因于運(yùn)動(dòng)、壓力等的腎上腺素分泌增加的狀態(tài)的受試者等。由于本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑具有有效地促進(jìn)脂質(zhì)代謝的效果，因此，可以用于使脂肪有效地燃燒，即使在與正常的人相比存在脂肪的分解慢且少的傾向的略微肥胖的人中也可以用于使脂肪有效地燃燒。

在本發(fā)明中，脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑的每一天的攝取量(施用量)沒有特別限定，可因年齡、癥狀、體重、用途等而不同，硬要舉例的話，可以設(shè)定為以使得脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑中所包含的氨基酸的固含量合計(jì)為0.3～30g、0.8～8g、1～5g、1.3～3.5g、1.5g或3g的攝取量。

在本發(fā)明中，精氨酸的每一天的攝取量可以例示0.06～12g(或0.4～70毫摩爾)、0.2～4g(或1～21毫摩爾)、0.4～2g(或2～11毫摩爾)、1.2g(7毫摩爾)、1g(6毫摩爾)、或0.6g(4毫摩爾)。

在本發(fā)明中，丙氨酸的每一天的攝取量可以例示0.03～10g(或0.3～112毫摩爾)、0.09～3g(或1～34毫摩爾)、0.2～2g(或2～17毫摩爾)、1g(11毫摩爾)、0.6g(6毫摩爾)、或0.3g(3毫摩爾)。

在本發(fā)明中，苯丙氨酸的每一天的攝取量可以例示0.02～10g(或0.1～61毫摩爾)、0.08～3g(或0.5～18毫摩爾)、0.2～2g(或0.9～9毫摩爾)、1g(6毫摩爾)、0.5g(3毫摩爾)、或0.2g(1毫摩爾)。

在本發(fā)明中，甘氨酸的每一天的攝取量可以例示4g以下(或59毫摩爾以下)、1.3g以下(或18毫摩爾以下)、0.7g以下(或9毫摩爾以下)、0.02～4g(或0.3～59毫摩爾)、0.07～1g(或1～18毫摩爾)、0.1～0.7g(或2～9毫摩爾)、0.4g(6毫摩爾)或0.2g(3毫摩爾)。

例如，在攝取2.7g的后述的表2所示的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑(制備例1)的情況下，攝取的合計(jì)2.7g(22毫摩爾)氨基酸中的精氨酸、丙氨酸及苯丙氨酸的量分別為1.2g(7.0毫摩爾)、0.57g(6.4毫摩爾)及0.47g(2.9毫摩爾)。

例如，在攝取3.0g的表2所示的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑(制備例2)的情況下，攝取的合計(jì)3.0g(23毫摩爾)氨基酸中的精氨酸、丙氨酸及苯丙氨酸的量分別為1.0g(5.7毫摩爾)、1.0g(11毫摩爾)及1.0g(6.1毫摩爾)。

例如，在攝取3g的表3所示的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑(制備例3)的情況下，攝取的合計(jì)3g(24毫摩爾)氨基酸中的精氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸及甘氨酸的量分別為1.2g(7.0毫摩爾)、0.57g(6.4毫摩爾)、0.47g(2.9毫摩爾)及0.45g(5.9毫摩爾)。

另外，在攝取1.5g的表3所示的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑(制備例3)的情況下，攝取的合計(jì)1.5g(24毫摩爾)氨基酸中的精氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸及甘氨酸的量分別為0.61g(3.5毫摩爾)、0.28g(3.2毫摩爾)、0.24g(1.4毫摩爾)及0.22g(3.0毫摩爾)。

予以說明的是，本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑可以與以往公知的具有脂質(zhì)代謝促進(jìn)效果的食品、飲品或藥品的攝取一起使用，或在這些食品、飲品或藥品的攝取之前或之后結(jié)合使用。

本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑的實(shí)際的形式可以列舉例如片劑(tablet)、膠囊劑、顆粒劑、粉劑、糖漿、液體、懸浮液、添加于飲料、飲品、食品等的形式，可以將其通過經(jīng)口、經(jīng)管、經(jīng)靜脈等而攝取或施用。通過將本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑添加于例如特定保健用食品等特別用途食品、營(yíng)養(yǎng)功能食品、營(yíng)養(yǎng)輔助食品或補(bǔ)充品而攝取，或通過添加于藥品而施用，可預(yù)期促進(jìn)脂質(zhì)代謝。予以說明的是，添加于特定保健用食品等特別用途食品、營(yíng)養(yǎng)功能食品、營(yíng)養(yǎng)輔助食品或補(bǔ)充品的情況下，消費(fèi)者可預(yù)期脂質(zhì)代謝的促進(jìn)，同時(shí)與一般食品清楚地區(qū)分。在此，飲品和食品可以用于家畜或?qū)櫸锏确侨藙?dòng)物的攝取。本發(fā)明還提供一種包含本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑的食品或藥品，例如用于促進(jìn)脂質(zhì)代謝的飲品、食品或藥品。

本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑也可以用于制備僅由本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑及用于制劑化的輔助劑構(gòu)成的藥劑。作為用于制劑化的輔助劑，可以列舉賦形劑、粘合劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑、矯臭劑、增溶劑、懸浮劑、包衣劑等。予以說明的是，這些物質(zhì)通?？梢栽陲嬈贰⑹称坊蛩幤返闹苿┗夹g(shù)的領(lǐng)域中使用。另外，可以在這些物質(zhì)中混合適當(dāng)量的維生素、礦物質(zhì)、有機(jī)酸、糖類、肽、上述中沒有列舉的氨基酸等。其它構(gòu)成成分可以優(yōu)先使用不抑制本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑的脂質(zhì)代謝促進(jìn)效果的物質(zhì)。

本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑可以混合于各種食品(牛奶、清涼飲料、發(fā)酵乳、酸奶、奶酪、面包、餅干、蘇打餅干、比薩餅皮、調(diào)制奶粉、流食、病人用食品、營(yíng)養(yǎng)食品、冷凍食品、加工食品其它市售食品等)而將其攝取。作為這些食品的形式，可以為液體、糊劑、凝膠、固體、粉末等。

混合有本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑的食品可以使用水、蛋白質(zhì)、碳水化合物、脂質(zhì)、維生素、礦物質(zhì)、有機(jī)酸、有機(jī)堿、果汁、香料等而制備。作為蛋白質(zhì)，可列舉例如：動(dòng)物和植物蛋白諸如全脂奶粉、脫脂奶粉、部分脫脂奶粉、酪蛋白、乳清粉、乳清蛋白、乳清蛋白濃縮物、乳清蛋白分離物、乳清蛋白水解產(chǎn)物、α-酪蛋白、β-酪蛋白、κ-酪蛋白、β-乳球蛋白、α-乳清蛋白、乳鐵蛋白、大豆蛋白、卵蛋白、肉類蛋白等、其分解產(chǎn)物、各種乳源成分等諸如黃油、乳清礦物質(zhì)、奶油、乳清、非蛋白氮、唾液酸、磷脂、乳糖等。還可以包含酪蛋白磷酸肽等肽或氨基酸。作為碳水化合物，可列舉例如：糖類、改性淀粉(除糊精之外，可溶性淀粉、英國(guó)淀粉、氧化淀粉、淀粉酯、淀粉醚等)、膳食纖維等。作為脂質(zhì)，可列舉動(dòng)物性油脂例如豬油、魚油以及它們的分餾油、氫化油、轉(zhuǎn)酯化油等；植物性油脂例如棕櫚油、紅花油、玉米油、菜籽油、椰子油以及它們的分餾油、氫化油、轉(zhuǎn)酯化油等。作為維生素類，可列舉例如：維生素A、胡蘿卜素類、維生素B族、維生素C、維生素D族、維生素E、維生素K族、維生素P、維生素Q、煙酸、尼克酸、泛酸、生物素、肌醇、膽堿、葉酸等。作為礦物質(zhì)，可列舉例如：鈣、鉀、鎂、鈉、銅、鐵、錳、鋅、硒等。作為有機(jī)酸，可列舉例如：蘋果酸、檸檬酸、乳酸、酒石酸、異抗壞血酸等。這些成分可以單獨(dú)使用，或?qū)⒍喾N類型組合而使用，可以使用合成產(chǎn)品和/或富含這些物質(zhì)的食品。作為這些食品的形式，可以為液體、糊劑、凝膠、固體、粉末等。

本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑通過在日常生活或醫(yī)療護(hù)理期間，以及在腎上腺素的分泌連續(xù)增加的狀態(tài)之前或期間的攝取，與攝取前相比能夠有效地促進(jìn)脂質(zhì)代謝。例如，已知在施加運(yùn)動(dòng)負(fù)荷、寒冷暴露、壓力負(fù)荷時(shí)、或在沐浴期間、或在多食者等中腎上腺素的分泌連續(xù)增加。因此，本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑可以在施加運(yùn)動(dòng)負(fù)荷、寒冷暴露、壓力負(fù)荷等之前、或與施加運(yùn)動(dòng)負(fù)荷、寒冷暴露、壓力負(fù)荷等同時(shí)攝取。可選地，本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑可以在沐浴之前或期間攝取。存在多食傾向的人也可以攝取本發(fā)明的質(zhì)代謝促進(jìn)劑。

本發(fā)明還提供了選自由精氨酸、丙氨酸及苯丙氨酸構(gòu)成的組中的至少2種氨基酸的組合，例如精氨酸、丙氨酸及苯丙氨酸的組合用于制備脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑的用途(使用方法)，其中，相對(duì)于所有氨基酸的摩爾數(shù)合計(jì)100摩爾，精氨酸、丙氨酸及苯丙氨酸的摩爾數(shù)合計(jì)為60摩爾以上。

另外，本發(fā)明還提供一種促進(jìn)脂質(zhì)代謝的方法(除醫(yī)療行為之外)，其特征在于，所述方法包括施用以相對(duì)于所包含的所有氨基酸的摩爾數(shù)合計(jì)(總氨基酸量)100摩爾，精氨酸、丙氨酸及苯丙氨酸的摩爾數(shù)合計(jì)為60摩爾以上的摩爾比的量包含選自由精氨酸、丙氨酸及苯丙氨酸構(gòu)成的組中的至少2種氨基酸的組合，例如精氨酸、丙氨酸及苯丙氨酸的組合物。

以下，關(guān)于本發(fā)明，列舉實(shí)施例進(jìn)行說明，但本發(fā)明并不受這些實(shí)施例限制。

實(shí)施例

實(shí)施例1

各種氨基酸與現(xiàn)有的氨基酸組合物(V.A.A.M.)的脂質(zhì)代謝促進(jìn)效果的比較

(1)材料及方法

測(cè)試樣品

·V.A.A.M.：以1g/10ml的濃度將表1所示的組成的氨基酸混合物(V.A.A.M.)懸浮于注射用水(大塚制藥)而制備。

·各種氨基酸：將L-丙氨酸(Ala)、L-甲硫氨酸(Met)、L-苯丙氨酸(Phe)、L-精氨酸(Arg)、甘氨酸(Gly)分別以1g/10ml的濃度懸浮于注射用水(大塚制藥)而制備。

表1

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

將6周齡的Wistar系雄性大鼠(SLC社)預(yù)備飼養(yǎng)1周而用于測(cè)試?；隗w重分組(媒介物組、V.A.A.M.組、丙氨酸組、甲硫氨酸組、苯丙氨酸組、精氨酸組、甘氨酸組的7個(gè)組，各組n＝6)，禁食18小時(shí)(其中，水設(shè)為自由攝取)。

從尾靜脈進(jìn)行采血(time-30)，之后立即經(jīng)口施用10ml/kg的測(cè)試樣品(測(cè)試樣品的劑量為1g/kg)(V.A.A.M.組、丙氨酸組、甲硫氨酸組、苯丙氨酸組、精氨酸組、甘氨酸組)或注射用水(媒介物組)。30分鐘后，再次進(jìn)行采血(time0)后，立即腹腔內(nèi)施用(0.2mg/kg、4ml/kg)腎上腺素((R)-(－)-腎上腺素，和光純藥工業(yè))。其后，隨時(shí)間推移每15分鐘進(jìn)行采血(time15、30、45、60、75)，至腎上腺素施用的75分鐘后。從采集的血液獲得血漿，測(cè)定血液中的甘油。

測(cè)定

血液中的甘油：使用甘油檢測(cè)試劑盒(GlycerolAssayKit；CaymanChemicalCamPany)按照附屬的說明書測(cè)定血漿中的甘油。算出由各測(cè)量時(shí)間的測(cè)定值減去time-30的測(cè)定值所得的值，將其設(shè)為血液中甘油濃度的變化量。接著，由血液中甘油濃度的變化量，算出time0～75的曲線下的面積(AUC)。進(jìn)而，算出各氨基酸組的AUC相對(duì)于媒介物組的AUC的變化率(％)。

(2)結(jié)果

圖1顯示血液中甘油濃度的變化率(甘油AUC變化率[GlycerolAUCchange])。丙氨酸組、甲硫氨酸組、苯丙氨酸組、精氨酸組、甘氨酸組均顯示高于V.A.A.M.組的值。

由此得知：丙氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、精氨酸、甘氨酸與現(xiàn)有的氨基酸組合物相比，顯示高的脂質(zhì)代謝促進(jìn)效果。

但是，確認(rèn)了各種氨基酸的味道，結(jié)果得知：甲硫氨酸的味道和氣味不適于經(jīng)口攝取。

實(shí)施例2

本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑(制備例1)與單獨(dú)的氨基酸的脂質(zhì)代謝促進(jìn)效果的比較

(1)材料及方法

測(cè)試樣品

·“制備例1”：以2.7g/10ml的濃度將表2所示的組成的氨基酸混合物(制備例1)懸浮于注射用水(大塚制藥)而制備。在10ml懸液中包含L-精氨酸1.2g、L-丙氨酸0.57g及L-苯丙氨酸0.47g。

·精氨酸：以1.2g/10ml的濃度將L-精氨酸懸浮于注射用水(大塚制藥)而制備。

·丙氨酸：以0.57g/10ml的濃度將L-丙氨酸懸浮于注射用水(大塚制藥)而制備。

·苯丙氨酸：以0.47g/10ml的濃度將L-苯丙氨酸懸浮于注射用水(大塚制藥)而制備。

表2

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

將6周齡的Wistar系雄性大鼠(SLC社)預(yù)備飼養(yǎng)1周而用于測(cè)試?；隗w重分組(媒介物組、“制備例1”組、精氨酸組、丙氨酸組、苯丙氨酸組的5組，各組n＝6)，禁食18小時(shí)(其中，水設(shè)為自由攝取)。

從尾靜脈進(jìn)行采血(time-30)，之后立即經(jīng)口施用5ml/kg的測(cè)試樣品(V.A.A.M.組、“制備例1”組、精氨酸組、丙氨酸組、苯丙氨酸組)或注射用水(媒介物組)。30分鐘后，再次進(jìn)行采血(time0)后，立即腹腔內(nèi)施用(0.2mg/kg、8ml/kg)腎上腺素((R)-(－)-腎上腺素，和光純藥工業(yè))。其后，隨時(shí)間推移每15分鐘進(jìn)行采血(time15、30、45、60、75、90)，至腎上腺素施用的90分鐘后。從采集的血液獲得血漿，測(cè)定血液中的甘油。

測(cè)定

血液中的甘油：使用甘油熒光檢測(cè)試劑盒(GlycerolFluorometricAssayKit；CaymanChemicalCamPany)，按照附屬的說明書測(cè)定血漿中的甘油。算出由各測(cè)量時(shí)間的測(cè)定值減去time-30的測(cè)定值所得的值，將其設(shè)為血液中甘油濃度的變化量。

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法

測(cè)定值用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差表示。就數(shù)據(jù)而言，使用統(tǒng)計(jì)軟件StatView5.0-J，利用F檢驗(yàn)的等方差檢驗(yàn)后，利用Fisher的PLSD進(jìn)行檢驗(yàn)。顯著性水平設(shè)為5％。

(2)結(jié)果

圖2顯示血液中甘油濃度的變化量(Δ甘油)?！爸苽淅?”組與媒介物組相比，血液中甘油濃度的變化量保持在更高的水平。在腎上腺素施用后15分鐘、30分鐘、45分鐘、60分鐘及75分鐘(time15、30、45、60、75)，“制備例1”組與媒介物組相比，顯示顯著更高的(P＜0.05)血液中甘油濃度的變化量。與媒介物組相比，苯丙氨酸組血液中甘油濃度的變化量?jī)H在腎上腺素施用后30分鐘(time30)顯著地升高。沒有觀察到其它組與媒介物組的顯著差異。

由此得知：就丙氨酸、苯丙氨酸、精氨酸而言，與單獨(dú)攝取相比，將這3種組合攝取顯示了更高的脂質(zhì)代謝促進(jìn)效果。

實(shí)施例3

本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑(制備例3)與現(xiàn)有的氨基酸組合物(V.A.A.M.)的脂質(zhì)代謝促進(jìn)效果的比較

(1)材料及方法

測(cè)試樣品

·V.A.A.M.：以3g/10ml的濃度將表1所示的組成的氨基酸混合物(V.A.A.M.)懸浮于注射用水(大塚制藥)而制備。

·“制備例3”：以3g/10ml的濃度將表3所示的組成的氨基酸混合物(制備例3)懸浮于注射用水(大塚制藥)而制備。

表3

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

將6周齡的Wistar系雄性大鼠(SLC社)預(yù)備飼養(yǎng)1周而用于測(cè)試?；隗w重分組(媒介物組、V.A.A.M.組、“制備例3”組的3組，各組n＝7)，禁食18小時(shí)(其中，水設(shè)為自由攝取)。

從尾靜脈進(jìn)行采血(time-30)，之后立即經(jīng)口施用5ml/kg的測(cè)試樣品(V.A.A.M.組、“制備例3”組)或注射用水(媒介物組)(表4)。30分鐘后，再次進(jìn)行采血(time0)后，立即腹腔內(nèi)施用(0.2mg/kg、8ml/kg)腎上腺素((R)-(－)-腎上腺素，和光純藥工業(yè))。其后，隨時(shí)間推移每15分鐘進(jìn)行采血(time15、30、45、60、75、90)，至腎上腺素施用的90分鐘后。從采集的血液獲得血漿，測(cè)定血液中的甘油。

表4

測(cè)定

血液中的甘油：使用甘油檢測(cè)試劑盒(GlycerolAssayKit；CaymanChemicalCamPany)，按照附屬的說明書測(cè)定血漿中的甘油。算出由各測(cè)量時(shí)間的測(cè)定值減去time-30的測(cè)定值所得的值，將其設(shè)為血液中甘油濃度的變化量。

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法

測(cè)定值用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差表示。就數(shù)據(jù)而言，使用統(tǒng)計(jì)軟件StatView5.0-J，利用F檢驗(yàn)的等方差檢驗(yàn)后，利用Fisher的PLSD進(jìn)行檢驗(yàn)。顯著性水平設(shè)為5％。

(2)結(jié)果

圖3顯示血液中甘油濃度的變化量?！爸苽淅?”組與V.A.A.M.組相比，血液中甘油濃度的變化量保持在更高的水平。在腎上腺素施用后30分鐘(time30)及45分鐘(time45)，“制備例3”組與媒介物組相比，顯示顯著更高(P＜0.05)的血液中甘油濃度的變化量。

由以上的結(jié)果得知：與現(xiàn)有的氨基酸組合物相比，以高水平包含丙氨酸、苯丙氨酸及精氨酸的本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑，顯示更高的脂質(zhì)代謝促進(jìn)效果。

實(shí)施例4

本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑(制備例3)在飼喂高脂肪食物并施加運(yùn)動(dòng)負(fù)荷的動(dòng)物中的脂質(zhì)代謝促進(jìn)效果

(1)材料及方法

測(cè)試樣品及飼料

·0.1％CMC溶液：將羧甲基纖維素(和光純藥)以0.1w/v％的濃度溶于注射用蒸餾水而制備。

·V.A.A.M.：以1g/10ml的濃度將表1所示的組成的氨基酸混合物(V.A.A.M.)懸浮于0.1％CMC溶液而制備。

·V.A.A.M.+CoQ10+L-肉堿：分別以1g/10ml、CoQ10為10mg/10ml、68mg/10ml的濃度將表1所示的組成的氨基酸混合物(V.A.A.M.)、輔酶Q10(CoQ10，太陽(yáng)化學(xué))和L-肉堿(三榮源FFI)懸浮于0.1％CMC溶液而制備。

·“制備例3”：以1g/10ml的濃度將表3所示的組成的氨基酸混合物(制備例3)懸浮于0.1％CMC溶液而制備。

·AIN-93M(ORIENTAL酵母工業(yè))：將組成示于表5。為用于使用由美國(guó)國(guó)立營(yíng)養(yǎng)研究所(AIN)在1993年(AIN-93)所發(fā)布的小鼠、大鼠的營(yíng)養(yǎng)研究的標(biāo)準(zhǔn)精制飼料。

·HFD-60(ORIENTAL酵母工業(yè))：將組成示于表5。具有60％的來自脂肪的卡路里的高脂肪飼料。

表5

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

將3周齡的C57BL/6J系雄性小鼠(CLEA社)進(jìn)行1周預(yù)備飼養(yǎng)及1周的跑步機(jī)馴化后，用于測(cè)試?；隗w重分組(第0天)(正常組(n＝9)、高脂肪組(n＝10)、H+V.A.A.M.組(n＝9)、H+V.A.A.M.+CoQ10+L-肉堿組(n＝10)、H+“制備例3”組(n＝10)的5組)，隨后從分組至42天后的測(cè)試最終日(第42天)，自由攝取AIN-93M(正常組)或HFD-60(高脂肪組、H+V.A.A.M.組、H+V.A.A.M.+CoQ10+L-肉堿組、H+“制備例3”組)(其中，水設(shè)為自由攝取)。

測(cè)試樣品的施用

除測(cè)試最終日之外的42天每天(第0天～第41天)使用飼喂針經(jīng)口強(qiáng)飼測(cè)試樣品(H+V.A.A.M.組、H+V.A.A.M.+CoQ10+L-肉堿組、H+“制備例3”組)或0.1％CMC溶液(正常組、高脂肪組)。1周制備1次測(cè)試樣品或0.1％CMC溶液用于使用，以表6所示的劑量(施用體積10mL/kg)進(jìn)行施用。

表6

利用跑步機(jī)的運(yùn)動(dòng)負(fù)荷

分組～測(cè)試最終日(第0天～第42天)期間，以1周3次的頻率進(jìn)行利用跑步機(jī)的運(yùn)動(dòng)負(fù)荷(15m/分鐘～20m/分鐘，40分鐘)。

體重測(cè)定

分組～測(cè)試最終日(第0天～第42天)期間，以3天1次的頻率進(jìn)行體重測(cè)定。

組織采取

在測(cè)試最終日(第42天)進(jìn)行解剖而測(cè)定腎周圍脂肪組織及褐色脂肪組織的重量，測(cè)定褐色脂肪組織中的UCP-1表達(dá)量。

測(cè)定

褐色脂肪組織中的UCP-1表達(dá)量：使用小鼠線粒體褐色脂肪解偶聯(lián)蛋白1(UCP1)ELISA試劑盒(CUSABIO)，按照附屬的說明書測(cè)定褐色脂肪組織中的UCP-1表達(dá)量。

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法

測(cè)定值用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差表示。就數(shù)據(jù)而言，使用統(tǒng)計(jì)軟件StatView5.0-J，利用F檢驗(yàn)的等方差檢驗(yàn)后，利用Fisher的PLSD進(jìn)行檢驗(yàn)。顯著性水平設(shè)為5％。

(2)結(jié)果

圖4顯示測(cè)試期間的體重測(cè)定及采食量/體重的結(jié)果。與正常組相比，在高脂肪組中，從施用第3天(day3)觀察到體重顯著地增加。與高脂肪組相比，在“制備例3”組中，從施用第3～42天(day3～day42)觀察到顯著的體重抑制效果。另一方面，與高脂肪組相比，沒有觀察到V.A.A.M.組及V.A.A.M.+CoQ10+L-肉堿組在體重上的差異。就測(cè)試期間的采食量/體重而言，與飼喂了AIN-93M的組相比，飼喂了HFD-60的各組顯示更低的值，但沒有觀察到飼喂了HFD-60的各組之間的差異。

圖5顯示腎周圍的脂肪重量。與正常組相比，在高脂肪組中，重量顯著地增加。與高脂肪組相比，制備例3組顯著地抑制脂肪組織重量的增加。另一方面，與高脂肪組相比，沒有觀察到V.A.A.M.組及V.A.A.M.+CoQ10+L-肉堿組在脂肪組織重量上的差異。

圖6顯示褐色脂肪組織中的UCP-1表達(dá)量。與正常組相比，在高脂肪組中，沒有觀察到UCP-1表達(dá)量上的變化。與高脂肪組相比，制備例3組的UCP-1表達(dá)量顯著地增加。另一方面，與高脂肪組相比，沒有觀察到V.A.A.M.組及V.A.A.M.+CoQ10+L-肉堿組在UCP-1表達(dá)量上的差異。

由以上的結(jié)果，可以確認(rèn)本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑在施加運(yùn)動(dòng)負(fù)荷時(shí)的脂質(zhì)代謝促進(jìn)效果。

實(shí)施例5

本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑的脂質(zhì)代謝促進(jìn)效果的效果確認(rèn)

(1)材料及方法

測(cè)試食品

使用外觀上不能識(shí)別內(nèi)容物的有無(wú)的膠囊(日本藥局方纖維素白膠囊(植物性)00號(hào))，制備下述2種測(cè)試食品。

·安慰劑：不包含內(nèi)容物的膠囊。

·活性組：封入3g表3中記載的制備例3的膠囊。

受試者

為了進(jìn)行受試者的選擇，預(yù)先對(duì)20歲以上的男性實(shí)施血液生物化學(xué)檢查、血液學(xué)的檢查及自行車運(yùn)動(dòng)(VS0)。在自行車運(yùn)動(dòng)中，進(jìn)行從運(yùn)動(dòng)開始至精疲力竭所需要的時(shí)間及最大氧攝取量(VO2max)的測(cè)定。此外，通過預(yù)先民意測(cè)驗(yàn)進(jìn)行生活習(xí)慣的確認(rèn)，基于上述結(jié)果，以健康且在從運(yùn)動(dòng)開始至精疲力竭所需要的時(shí)間和VO2max上沒有偏斜為條件，進(jìn)行受試者的選擇。

在這次測(cè)試中，在滿足下述(1)～(4)的判定基準(zhǔn)的2個(gè)以上時(shí)，判斷為受試者精疲力竭。此外，將在判斷為精疲力竭之前獲得的最大的氧攝取量設(shè)為VO2max。

(1)通過氧攝取量(VO2)的增加而出現(xiàn)高原現(xiàn)象。

(2)呼吸交換率(VCO2/VO2)達(dá)到1.1以上。

(3)心率(HR)達(dá)到所預(yù)期的對(duì)20歲而言為最高的心率(HRmax)，即200。

(4)使用Borgscale日本語(yǔ)版(小野寺等，全身持久性運(yùn)動(dòng)中的主觀的強(qiáng)度和客觀的強(qiáng)度的對(duì)應(yīng)性：從RatingofPerceivedexertion的觀點(diǎn)出發(fā)，體育學(xué)研究，21(4)，P.191-203(1976))的主觀運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度(RPE)為19(非常非常吃力(veryveryhard))以上。

自行車運(yùn)動(dòng)使用自行車測(cè)力計(jì)，在轉(zhuǎn)速60轉(zhuǎn)/分鐘的條件下，運(yùn)動(dòng)開始0～1分鐘為100W，其以后每1分鐘提高25W運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度，進(jìn)行運(yùn)動(dòng)直至精疲力竭(多階段漸增運(yùn)動(dòng)負(fù)荷測(cè)試)。

用如此選擇的20.5±0.2歲(平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差)的受試者男性12名進(jìn)行雙重盲驗(yàn)交叉比較測(cè)試。

測(cè)試日程

從VS0隔開14天的間隔實(shí)施第1次測(cè)試(VS1)。在VS1中，攝取2種測(cè)試食品中的一種，進(jìn)行自行車運(yùn)動(dòng)、采血、呼出氣體的采集和分析及心率的測(cè)定。進(jìn)而，從VS1隔開7天的間隔進(jìn)行第2次測(cè)試(VS2)。在VS2中，攝取與VS1不同的測(cè)試食品，進(jìn)行自行車運(yùn)動(dòng)、采血、呼出氣體的采集和分析及心率的測(cè)定。

予以說明的是，測(cè)試開始日(VS0)以后，至檢查結(jié)束時(shí)(VS2)，進(jìn)行指導(dǎo)以實(shí)現(xiàn)限制顯著超出日常范圍的過度運(yùn)動(dòng)、飲食或過食。進(jìn)而，有可能對(duì)本測(cè)試產(chǎn)生影響的補(bǔ)充品、健康食品、藥品(包含一般用藥品)的使用及吸煙被禁止。進(jìn)而，進(jìn)行指導(dǎo)以實(shí)現(xiàn)測(cè)試(VS0、VS1、VS2)前一天禁酒、至22時(shí)結(jié)束吃飯、至深夜0時(shí)就寢，測(cè)試當(dāng)天，至開始自行車運(yùn)動(dòng)的2小時(shí)前結(jié)束吃飯，其以后至檢查結(jié)束禁止飲食(可以飲水)。另外，進(jìn)行指導(dǎo)以實(shí)現(xiàn)檢查當(dāng)天在相同的時(shí)刻起床，測(cè)試的實(shí)施盡可能在相同的時(shí)間帶進(jìn)行。

測(cè)試VS1及測(cè)試VS2的實(shí)施

·測(cè)試食品的攝?。菏褂盟虬组_水在不咀嚼的情況吞入而攝取所述的測(cè)試食品。

·自行車運(yùn)動(dòng)：使用自行車測(cè)力計(jì)，在測(cè)試食品攝取30分鐘后～測(cè)試食品攝取90分鐘后(time30～90)的60分鐘、轉(zhuǎn)速60轉(zhuǎn)/分鐘的條件下，以VS0中測(cè)定的VO2max的50％的運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度持續(xù)地實(shí)施。

·采血：在測(cè)試食品攝取前及測(cè)試食品攝取的15、30、45、60、75、90、120、150分鐘后(time0、15、30、45、60、75、90、120、150)實(shí)施。

·呼出氣體的采集和分析：使用每口呼氣法(BreathbyBreath)，從測(cè)試食品攝取之后立即～測(cè)試食品攝取150分鐘后(time0～time150)的150分鐘持續(xù)地實(shí)施。

·心率的測(cè)定：測(cè)試食品攝取之后立即～測(cè)試食品攝取150分鐘后(time0～time150)的150分鐘持續(xù)地實(shí)施。

測(cè)定

·呼吸交換率：每次呼吸用氣體分析裝置測(cè)定采集的呼氣，測(cè)定呼氣中的O2及CO2的濃度、呼氣的流量?；谠摐y(cè)定值，算出氧攝取量(VO2)(ml/體重kg/min)、二氧化碳產(chǎn)生量(VCO2(ml/體重kg/min))及呼吸交換率(VCO2/VO2)。進(jìn)而，從各時(shí)刻的呼吸交換率減去time0的各組的呼吸交換率的平均值，求出呼吸交換率的變化量(ΔVCO2/VO2)。

·血液中的甘油：使用酶法，按照附屬的說明書測(cè)定血清中的甘油。

·血液中的游離脂肪酸：使用酶-UV法測(cè)定血清中的游離脂肪酸濃度。

·血液中的皮質(zhì)醇：使用CLEIA(化學(xué)發(fā)光酶免疫測(cè)定)法測(cè)定血漿中的皮質(zhì)醇濃度。

·血液中的胰高血糖素：使用RIA2抗體(雙抗體放射免疫測(cè)定)法測(cè)定血漿中的胰高血糖素濃度。

·血液中的胰島素：使用CLIA(化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定)法測(cè)定血清中的胰島素濃度。

·血糖：使用酶法測(cè)定血糖值。

·血液中的總酮體：使用酶法測(cè)定血清中的總酮體濃度(3-羥基丁酸及乙酰乙酸的合計(jì))。

·血液中的3-羥基丁酸：使用酶法測(cè)定血清中的3-羥基丁酸濃度。

·血液中的乙酰乙酸：使用酶法測(cè)定血清中的乙酰乙酸濃度。

·血液中的生長(zhǎng)激素：使用CLEIA法測(cè)定血清中的生長(zhǎng)激素濃度。

·血液中的腎上腺素：使用HPLC(高效液相色譜)法測(cè)定血漿中的腎上腺素濃度。

·血液中的去甲腎上腺素：使用HPLC法測(cè)定血漿中的去甲腎上腺素濃度。

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法

測(cè)試中獲得的各測(cè)定值、計(jì)算值或換算值用單樣本t檢驗(yàn)進(jìn)行評(píng)價(jià)。

(2)結(jié)果

圖7顯示了隨時(shí)間推移的呼吸交換率的變化量(ΔVCO2/VO2)的結(jié)果。就ΔVCO2/VO2而言，從運(yùn)動(dòng)開始至運(yùn)動(dòng)結(jié)束后，活性組保持低的值，與安慰劑組相比，在運(yùn)動(dòng)期間在time85、90(分鐘)時(shí)，觀察到顯著的降低。在運(yùn)動(dòng)結(jié)束時(shí)，在time95、100(分鐘)時(shí)，兩組均暫時(shí)上升，但其后至time135(分鐘)，急劇地降低。特別地，雖然在time125～135(分鐘)之間沒有觀察到顯著的差異，但是，活性組顯示較低的平均值。

圖8顯示了隨時(shí)間推移的血液中甘油的濃度及游離脂肪酸的濃度的測(cè)定結(jié)果。血液中甘油的濃度在運(yùn)動(dòng)期間在time45及90(分鐘)時(shí)雖然沒有觀察到顯著的差異，但是，活性組顯示更高的平均值。

從運(yùn)動(dòng)開始時(shí)(time30(分鐘))至測(cè)試結(jié)束時(shí)(time150(分鐘))，活性組顯示較高的血液中游離脂肪酸平均值，在運(yùn)動(dòng)期間在time90(分鐘)時(shí)顯示最高的平均值。

圖9顯示了隨時(shí)間推移的血液中的皮質(zhì)醇、胰高血糖素、胰島素的濃度及血糖的測(cè)定結(jié)果。

就皮質(zhì)醇而言，從(運(yùn)動(dòng)前的)time0～15(分鐘)上升，但其后減少。在time15～75(分鐘)時(shí)，活性組的值較低，在time45(分鐘)時(shí)觀察到顯著的差異。

就胰高血糖素而言，值從運(yùn)動(dòng)開始后的time30(分鐘)上升，在運(yùn)動(dòng)期間在time75(分鐘)時(shí)，活性組顯示顯著高的值。另外，在運(yùn)動(dòng)后的time120(分鐘)時(shí)，活性組顯示顯著高的值。

就胰島素及血糖而言，在活性組和安慰劑組之間沒有觀察到差異。

圖10顯示了隨時(shí)間推移的血液中的總酮體、3-羥基丁酸及乙酰乙酸的濃度的測(cè)定結(jié)果。就總酮體及3-羥基丁酸而言，至運(yùn)動(dòng)時(shí)的time45(分鐘)(從運(yùn)動(dòng)開始15分鐘后)，活性組、安慰劑組均暫時(shí)降低，但其后開始上升，至time45～150(分鐘)，活性組的上升量較大，在time120(分鐘)，平均值為最大。在time60(分鐘)時(shí)的測(cè)定值中觀察到顯著的差異。關(guān)注于隨時(shí)間推移的變化時(shí)，在施加運(yùn)動(dòng)負(fù)荷之后(time120及time150)，觀察到活性組的酮體的產(chǎn)生顯著升高的傾向。

就乙酰乙酸而言，雖然在兩組中沒有觀察到顯著的差異，但是顯示與總酮體同樣的變化。

圖11顯示了血液中的生長(zhǎng)激素、腎上腺素及去甲腎上腺素的濃度的測(cè)定結(jié)果。就生長(zhǎng)激素而言，從測(cè)試開始時(shí)(time0)，活性組和安慰劑組均上升，幾乎顯示同樣的變化。在活性組和安慰劑組之間沒有觀察到顯著的差異。就腎上腺素及去甲腎上腺素而言，在運(yùn)動(dòng)開始(time30)的同時(shí)值上升，在運(yùn)動(dòng)結(jié)束(time90)的同時(shí)值降低。在活性組和安慰劑組之間均沒有觀察到顯著的差異。

由以上的結(jié)果，本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑在施加運(yùn)動(dòng)負(fù)荷時(shí)的脂質(zhì)代謝促進(jìn)效果能夠在人中得到確認(rèn)。此外還得知：本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑在不會(huì)對(duì)胰島素、生長(zhǎng)激素、腎上腺素及去甲腎上腺素的分泌產(chǎn)生影響的情況下，起到脂質(zhì)代謝促進(jìn)效果。

實(shí)施例6

混合有本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑的飲料的制備

以表3所示的制備例3為1.5w/v％、甜味劑為1.0w/v％、酸味劑為0.9w/v％及增稠劑為0.2w/v％的濃度混合，按照常規(guī)方法制備飲料。攝取飲料200ml時(shí)，可以攝取3g制備例3。

實(shí)施例7

混合有本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑的片劑的制備

以表3所示的制備例3為50w/w％，賦形劑、粘合劑、崩解劑及潤(rùn)滑劑合計(jì)為50w/w％進(jìn)行混合，按照常規(guī)方法制備片劑。

實(shí)施例8

混合有本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑的補(bǔ)充品的制備

以L-精氨酸1g(5.7毫摩爾)、L-丙氨酸1g(11毫摩爾)、L-苯丙氨酸1g(6.1毫摩爾)的比例進(jìn)行混合，隨后添加賦形劑，填充于膠囊。

實(shí)施例9

脂質(zhì)代謝指標(biāo)的測(cè)定

(1)材料及方法

測(cè)試樣品

通過將表3所示的組成的氨基酸混合物(制備例3)及表1所示的組成的氨基酸混合物(V.A.A.M.)分別懸浮于蒸餾水而制備測(cè)試樣品。

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

將3周齡的雄性小鼠C57BL/6J(日本CLEA社)預(yù)備飼養(yǎng)5天，進(jìn)一步進(jìn)行2天的跑步機(jī)馴化之后，用于實(shí)驗(yàn)。馴化期間結(jié)束后，測(cè)定體重，以各組的平均體重為相同的方式進(jìn)行分組(正常組、高脂肪組、H+V.A.A.M.組及H+制備例3組)。水設(shè)為自由攝取。

將測(cè)試系統(tǒng)的概略及組的構(gòu)成示于以下的表7?？紤]到在高脂肪食物攝取下脂質(zhì)代謝降低，使正常組以外的3組攝取高脂肪飼料HFD-60。

表7

*H表示高脂肪(高脂肪飲食)。

馴化期間結(jié)束后，除最終日之外的4天每天使用飼喂針對(duì)小鼠經(jīng)口強(qiáng)飼測(cè)試樣品。4天的施用期間中，以2天一次的比例用跑步機(jī)強(qiáng)制地進(jìn)行運(yùn)動(dòng)(強(qiáng)制行走)。利用跑步機(jī)以15m/分鐘的速度持續(xù)40分鐘施加運(yùn)動(dòng)負(fù)荷。在利用跑步機(jī)施加運(yùn)動(dòng)負(fù)荷的30分鐘前，施用測(cè)試樣品。從施用開始后第4天至第5天，禁食18小時(shí)。

在施用開始后第5天進(jìn)行解剖。解剖日當(dāng)天，為了研究從施用時(shí)開始隨時(shí)間推移的變化，將各組的小鼠分成3個(gè)組。具體而言，分成在施用前進(jìn)行解剖的組(施用前(0))、在施用30分鐘后進(jìn)行解剖的組(運(yùn)動(dòng)前(30))、在從施用30分鐘后60分鐘的跑步機(jī)運(yùn)動(dòng)后進(jìn)行解剖的組(運(yùn)動(dòng)后(90))，解剖日當(dāng)天實(shí)施測(cè)試樣品的施用及施加運(yùn)動(dòng)負(fù)荷，進(jìn)行采血和解剖。就采集的肝臟而言，測(cè)定重量之后，立即用液氮冷凍，在進(jìn)行β氧化相關(guān)酶的測(cè)定之前，在－80℃下冷凍保存。

測(cè)定

對(duì)獲得的血液，使用胰高血糖素比色定量ELISA試劑盒MercodiaGlucagonELISAKit(Mercodia)按照附屬的說明書測(cè)定血清中的胰高血糖素濃度(血液中胰高血糖素濃度)。

另外，對(duì)肝臟的β氧化相關(guān)酶活性(肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶活性、酰基CoA氧化酶活性)，用以下的步驟進(jìn)行測(cè)定。首先，通過將肝臟均質(zhì)化并進(jìn)行離心分離而分離上清液，獲得肝臟總均漿組分。針對(duì)該組分，通過將Marlwell等的方法改變一部分而使用，測(cè)定肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶活性。具體而言，在包含最終濃度0.04mM棕櫚酰CoA、0.25mMDTNB(EELMAN試劑)、1.25mMEDTA及0.1％Triton-X100的58mMTris鹽酸緩沖液(PH8.0)中添加獲得的肝臟總均漿組分，通過30℃、412nm下的吸光度測(cè)定而監(jiān)測(cè)反應(yīng)5分鐘，其后，添加L-肉堿(終濃度1.25mM)，持續(xù)5分鐘監(jiān)測(cè)CoA的產(chǎn)生(總量200μL)，由此測(cè)定肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶活性。

另外，針對(duì)肝臟總均漿組分，通過將Hashimoto等的方法改變一部分而使用，測(cè)定酰基CoA氧化酶活性。具體而言，在包含最終濃度0.1mM棕櫚酰CoA、10.6mM苯酚、0.82mM4-氨基安替比林、10μMFAD、4U過氧化酶(辣根)及0.2mg牛白蛋白的50mM磷酸鉀緩沖液(PH7.4)中添加獲得的肝臟總均漿組分，在30℃下以500nm監(jiān)測(cè)吸光度11分鐘(總量200μL)。

進(jìn)而，使用BCA法測(cè)定獲得的肝臟總均漿組分中的蛋白質(zhì)量。在測(cè)定中使用TaKaRaBCAProteinAssayKitT9300A，按照附屬的說明書進(jìn)行測(cè)定。

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法

各種測(cè)定值用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差表示。就數(shù)據(jù)而言，使用統(tǒng)計(jì)軟件StatView5.0-J，通過F檢驗(yàn)確認(rèn)各組的方差齊性之后，通過Fisher的PLSD進(jìn)行多組比較的檢驗(yàn)。顯著性水平設(shè)為兩側(cè)5％。

(2)結(jié)果

圖12顯示血液中胰高血糖素濃度的測(cè)定結(jié)果。與高脂肪組相比，H+制備例3組顯示在運(yùn)動(dòng)前(施用后30分鐘)血液中胰高血糖素濃度的顯著的上升。即顯示：本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑使具有脂肪分解促進(jìn)作用的胰高血糖素的分泌在運(yùn)動(dòng)前增加，由此可以有效地促進(jìn)運(yùn)動(dòng)時(shí)的脂質(zhì)代謝。

圖13顯示肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶活性的測(cè)定結(jié)果。與高脂肪組相比，H+制備例3組顯示在施用前及運(yùn)動(dòng)前(施用后30分鐘)肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶活性的顯著的上升。

圖14顯示?；鵆oA氧化酶活性的測(cè)定結(jié)果。與高脂肪組相比，H+制備例3組顯示在施用前酰基CoA氧化酶活性的顯著的上升。

作為肝臟β氧化相關(guān)酶的肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶和?；鵆oA氧化酶已知作為脂質(zhì)代謝的速率決定酶，由此顯示：本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑通過增強(qiáng)這些β氧化相關(guān)酶的活性也可以促進(jìn)脂質(zhì)代謝。

由以上的結(jié)果顯示：以高水平包含丙氨酸、苯丙氨酸及精氨酸的本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑顯示高的脂質(zhì)代謝促進(jìn)效果。

實(shí)施例10

脂質(zhì)代謝指標(biāo)的測(cè)定

(1)材料及方法

測(cè)試樣品

作為測(cè)試樣品，使用將(i)丙氨酸(丙氨酸：精氨酸＝10：0)、(ii)丙氨酸和精氨酸的7.5：2.5混合物、(iii)丙氨酸和精氨酸的5：5混合物、(iv)丙氨酸和精氨酸的2.5：7.5混合物、(v)精氨酸(丙氨酸：精氨酸＝0：10)分別懸浮于注射用水(大塚制藥)而制備的溶液。

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

將6周齡的Wistar系雄性大鼠(SLC社)預(yù)備飼養(yǎng)后，用于測(cè)試。測(cè)試前一天的早晨測(cè)定大鼠的體重，以平均體重為相同的方式分組。將測(cè)試系統(tǒng)的概略及組的構(gòu)成示于以下的表8。

表8

從測(cè)試前一天的傍晚進(jìn)行18小時(shí)的禁食。但是水設(shè)為自由攝取。

測(cè)試當(dāng)天，從尾靜脈進(jìn)行采血(施用30分前；time-30)，立即以相對(duì)于大鼠體重1g/kg的劑量經(jīng)口施用(5ml/kg)測(cè)試樣品。采血30分鐘后，再次進(jìn)行采血(time0)后，立即以0.2mg/kg的劑量腹腔內(nèi)施用(8ml/kg)腎上腺素((R)-(－)-腎上腺素，和光純藥工業(yè)社)。其后，隨時(shí)間推移每15分鐘進(jìn)行采血(time15、30、45、60、75、90)，至腎上腺素施用的90分鐘后。從采集的血液獲得血漿，測(cè)定血液中的甘油。

測(cè)定

使用甘油檢測(cè)試劑盒(CaymanChemicalCamPany)，按照附屬的說明書測(cè)定血漿中的甘油。算出由各測(cè)量時(shí)間的測(cè)定值減去time0的測(cè)定值所得的值，將其設(shè)為血液中甘油濃度的變化量。

(2)結(jié)果

得知：與對(duì)照組相比，丙氨酸(Ala)：精氨酸(Arg)＝2.5：7.5組、5：5組、7.5：2.5組、10：0組的血液中甘油濃度的變化量保持在較高水平。另外，丙氨酸和精氨酸以1：1混合時(shí)，顯示最高的脂質(zhì)代謝促進(jìn)效果。

實(shí)施例11

脂質(zhì)代謝指標(biāo)的測(cè)定

(1)材料及方法

測(cè)試樣品

作為測(cè)試樣品，使用將(i)丙氨酸(丙氨酸：苯丙氨酸＝10：0)、(ii)丙氨酸和苯丙氨酸的7.5：2.5混合物、(iii)丙氨酸和苯丙氨酸的5：5混合物、(iv)丙氨酸和苯丙氨酸的2.5：7.5混合物、(v)苯丙氨酸(丙氨酸：苯丙氨酸＝0：10)分別懸浮于注射用水(大塚制藥)而制備的溶液。

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

將6周齡的Wistar系雄性大鼠(SLC社)預(yù)備飼養(yǎng)后，用于測(cè)試。測(cè)試前一天的早晨測(cè)定大鼠的體重，以平均體重為相同的方式分組。將測(cè)試系統(tǒng)的概略及組的構(gòu)成示于以下的表9。

表9

從測(cè)試前一天的傍晚進(jìn)行18小時(shí)的禁食。但是水設(shè)為自由攝取。

測(cè)試當(dāng)天，從尾靜脈進(jìn)行采血(time-30)，立即以相對(duì)于大鼠體重1g/kg的劑量經(jīng)口施用(5ml/kg)測(cè)試樣品。采血30分鐘后，再次進(jìn)行采血(time0)后，立即以0.2mg/kg的劑量腹腔內(nèi)施用(8ml/kg)腎上腺素((R)-(－)-腎上腺素，和光純藥工業(yè)社)。其后，隨時(shí)間推移每15分鐘進(jìn)行采血(time15、30、45、60、75、90)，至腎上腺素施用的90分鐘后。從采集的血液獲得血漿，測(cè)定血液中的甘油濃度。

測(cè)定

使用甘油檢測(cè)試劑盒(CaymanChemicalCamPany)，按照附屬的說明書測(cè)定血漿中的甘油。算出由各測(cè)量時(shí)間的測(cè)定值減去time0的測(cè)定值所得的值，將其設(shè)為血液中甘油濃度的變化量。

(2)結(jié)果

得知：與對(duì)照組相比，丙氨酸(Ala)：苯丙氨酸(Phe)＝2.5：7.5組、5：5組、7.5：2.5組、10：0組的血液中甘油濃度的變化量保持在較高的水平。另外，丙氨酸和苯丙氨酸以1：3混合時(shí)，顯示最高的脂質(zhì)代謝促進(jìn)效果。

實(shí)施例12

脂質(zhì)代謝指標(biāo)的測(cè)定

(1)材料及方法

測(cè)試樣品

作為測(cè)試樣品，使用將(i)精氨酸(精氨酸：苯丙氨酸＝10：0)、(ii)精氨酸和苯丙氨酸的7.5：2.5混合物、(iii)精氨酸和苯丙氨酸的5：5混合物、(iv)精氨酸和苯丙氨酸的2.5：7.5混合物、(v)苯丙氨酸(精氨酸：苯丙氨酸＝0：10)分別懸浮于注射用水(大塚制藥)而制備的溶液。

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

將6周齡的Wistar系雄性大鼠(SLC社)預(yù)備飼養(yǎng)后，用于測(cè)試。測(cè)試前一天的早晨測(cè)定大鼠的體重，以平均體重為相同的方式分組。將測(cè)試系統(tǒng)的概略及組的構(gòu)成示于以下的表10。

表10

從測(cè)試前一天的傍晚進(jìn)行18小時(shí)的禁食。但是水設(shè)為自由攝取。

測(cè)試當(dāng)天，從尾靜脈進(jìn)行采血(time-30)，立即以相對(duì)于大鼠體重1g/kg的劑量經(jīng)口施用(5ml/kg)測(cè)試樣品。采血30分鐘后，再次進(jìn)行采血(time0)后，立即以0.2mg/kg的劑量腹腔內(nèi)施用(8ml/kg)腎上腺素((R)-(－)-腎上腺素，和光純藥工業(yè)社)。其后，隨時(shí)間推移每15分鐘進(jìn)行采血(time15、30、45、60、75、90)，至腎上腺素施用的90分鐘后。從采集的血液獲得血漿，測(cè)定血液中的甘油濃度。

測(cè)定

使用甘油檢測(cè)試劑盒(CaymanChemicalCamPany)，按照附屬的說明書測(cè)定血漿中的甘油。算出由各測(cè)量時(shí)間的測(cè)定值減去time0的測(cè)定值所得的值，將其設(shè)為血液中甘油濃度的變化量。

(2)結(jié)果

圖15顯示血液中甘油濃度的變化量(Δ甘油)。與對(duì)照組相比，精氨酸(Arg)：苯丙氨酸(Phe)＝2.5：7.5組和5：5組的血液中甘油濃度的變化量保持在較高的水平。另外得知：精氨酸和苯丙氨酸以1：3混合時(shí)，顯示最高的脂質(zhì)代謝促進(jìn)效果。

實(shí)施例13

脂質(zhì)代謝指標(biāo)的測(cè)定

(1)材料及方法

測(cè)試樣品

作為測(cè)試樣品，使用將在實(shí)施例10～12中分別顯示高的脂肪成分解能力的(i)丙氨酸和精氨酸的1：1重量比混合物、(ii)丙氨酸和苯丙氨酸的1：3重量比混合物、(iii)精氨酸和苯丙氨酸的1：3重量比混合物、(iv)表3所示的組成的氨基酸混合物(制備例3)分別懸浮于注射用水(大塚制藥)而制備的溶液。

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

將6周齡的Wistar系雄性大鼠(SLC社)預(yù)備飼養(yǎng)后，用于測(cè)試。測(cè)試前一天的早晨測(cè)定大鼠的體重，以平均體重為相同的方式分組。將測(cè)試系統(tǒng)的概略及組的構(gòu)成示于以下的表11。

表11

從測(cè)試前一天的傍晚進(jìn)行18小時(shí)的禁食。但是水設(shè)為自由攝取。

測(cè)試當(dāng)天，從尾靜脈進(jìn)行采血(time-30)，立即以相對(duì)于大鼠體重1g/kg的劑量經(jīng)口施用(5ml/kg)測(cè)試樣品。采血30分鐘后，再次進(jìn)行采血(time0)后，立即以0.2mg/kg的劑量腹腔內(nèi)施用(8ml/kg)腎上腺素((R)-(－)-腎上腺素，和光純藥工業(yè)社)。其后，隨時(shí)間推移每15分鐘進(jìn)行采血(time15、30、45、60、75、90)，至腎上腺素施用的90分鐘后。從采集的血液獲得血漿，測(cè)定血液中的甘油。

測(cè)定

使用甘油檢測(cè)試劑盒(CaymanChemicalCamPany)，按照附屬的說明書測(cè)定血漿中的甘油。基于由各測(cè)量時(shí)間的測(cè)定值減去time0的測(cè)定值所得的值，算出time0～time90的血液中甘油AUC(血液中濃度-時(shí)間曲線下面積)。

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法

測(cè)定值用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差表示。就數(shù)據(jù)而言，使用統(tǒng)計(jì)軟件StatView5.0-J，利用F檢驗(yàn)的等方差檢驗(yàn)后，利用Fisher的PLSD進(jìn)行檢驗(yàn)。顯著性水平設(shè)為5％。

(2)結(jié)果

圖16顯示所算出的血液中甘油AUC(min·mg/L)。與對(duì)照組相比，在Ala：Arg＝1：1組、Ala：Phe＝1：3組、Arg：Phe＝1：3組及制備例3組的所有組中，血液中甘油AUC較高。

實(shí)施例14

脂質(zhì)代謝指標(biāo)的測(cè)定

(1)材料及方法

測(cè)試樣品

作為測(cè)試樣品，使用將在實(shí)施例13中顯示最高的脂肪分解能力的(i)丙氨酸和精氨酸的1：1重量比混合物、根據(jù)實(shí)施例10～12的結(jié)果而確定了混合比的(ii)丙氨酸和精氨酸和苯丙氨酸的1：1：3重量比混合物、(iii)丙氨酸和精氨酸和苯丙氨酸的1：1：6重量比混合物分別懸浮于注射用水(大塚制藥)而制備的溶液。

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

將6周齡的Wistar系雄性大鼠(SLC社)預(yù)備飼養(yǎng)后，用于測(cè)試。測(cè)試前一天的早晨測(cè)定大鼠的體重，以平均體重為相同的方式分組。將測(cè)試系統(tǒng)的概略及組的構(gòu)成示于以下的表12。

表12

從測(cè)試前一天的傍晚進(jìn)行18小時(shí)的禁食。但是水設(shè)為自由攝取。

測(cè)試當(dāng)天，從尾靜脈進(jìn)行采血(time-30)，立即以相對(duì)于大鼠體重1g/kg的劑量經(jīng)口施用(5ml/kg)測(cè)試樣品。采血30分鐘后，再次進(jìn)行采血(time0)后，立即以0.2mg/kg的劑量腹腔內(nèi)施用(8ml/kg)腎上腺素((R)-(－)-腎上腺素，和光純藥工業(yè)社)。其后，隨時(shí)間推移每15分鐘進(jìn)行采血(time15、30、45、60、75、90)，至腎上腺素施用的90分鐘后。從采集的血液獲得血漿，測(cè)定血液中的甘油。

測(cè)定

使用甘油檢測(cè)試劑盒(CaymanChemicalCamPany)，按照附屬的說明書測(cè)定血漿中的甘油。算出由各測(cè)量時(shí)間的測(cè)定值減去time0的測(cè)定值所得的值，將其設(shè)為血液中甘油濃度的變化量?；谟筛鳒y(cè)量時(shí)間的測(cè)定值減去time0的測(cè)定值所得的值，算出time0～time90的血液中的甘油AUC(血液中的濃度-時(shí)間曲線下面積)。

(2)結(jié)果

圖17顯示所算出的血液中的甘油AUC(min·mg/L)。與對(duì)照組相比，在丙氨酸(Ala)：精氨酸(Arg)＝1：1組和丙氨酸(Ala)：精氨酸(Arg)：苯丙氨酸(Phe)＝1：1：3組和1：1：6組中，血液中的甘油AUC較高。

由以上的結(jié)果進(jìn)一步顯示：包含丙氨酸、苯丙氨酸及精氨酸中的2個(gè)或3個(gè)的組合的本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑顯示高的脂質(zhì)代謝促進(jìn)效果。

工業(yè)上的可利用性

根據(jù)本發(fā)明的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑，可以有效地促進(jìn)脂肪消耗，另外，在相同的運(yùn)動(dòng)量中還產(chǎn)生更高的體脂肪減少效果，可以開發(fā)能夠預(yù)期這種效果的脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑或使用其的制品。

將本說明書中引用的全部的刊行物、專利及專利申請(qǐng)的全部通過參照引入本說明書中。

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網(wǎng)址: 脂質(zhì)代謝促進(jìn)劑.pdf http://m.gysdgmq.cn/newsview357943.html