血漿、血清和腦脊液等生物體液中存在的生物標(biāo)志物已成為神經(jīng)退行性疾病的臨床診斷和預(yù)后不可或缺的一部分。例如，Aβ42/40或總/磷酸化tau蛋白比例變化可預(yù)測阿爾茲海默癥患者的病程發(fā)展，神經(jīng)絲蛋白輕鏈（NfL）水平的變化也成為了各種神經(jīng)退行性疾病的廣泛生物標(biāo)志物。然而這些神經(jīng)細胞因子含量相對較低，若沒有好的檢測技術(shù)，很容易由于檢測靈敏問題出現(xiàn)不理想的結(jié)果。為此，我們?yōu)槟砹?022年9月份發(fā)表的3篇（Lancet Neurol、JAMA Oncology、Alzheimer's & Dementia）高水平文獻，解析其研究思路及技術(shù)手段，希望對我們神經(jīng)領(lǐng)域的科研工作者們有所幫助。
案例1：血漿t-tau、Nfl可作為嗅覺缺失和腦老化標(biāo)志物
2022年9月，山東第一醫(yī)科大學(xué)附屬省立醫(yī)院杜怡峰教授團隊在國際癡呆研究頂級期刊Alzheimer's & Dementia（IF=16.655）雜志發(fā)表題為“Anosmia, mild cognitive impairment, and biomarkers of brain aging in older adults”的研究成果，發(fā)現(xiàn)血漿t-tau、NfL 可作為嗅覺缺失和腦老化標(biāo)志物。
為了評估血漿t-tau、Nfl水平與嗅覺缺失和腦老化的相關(guān)性，研究納入4214例樣本，其中1102例輕度認知障礙（mild cognitive impairment，MCI），931例遺忘型MCI（amnestic MCI），171例非遺忘型MCI（non-amnestic MCI）。在子樣本中，使用simoa技術(shù)測定1054例樣本血漿Aβ40，Aβ42，t-tau，Nfl水平（華盈生物提供技術(shù)支持）。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，嗅覺障礙與 MCI、遺忘型 MCI 和非遺忘型 MCI 的可能性增加顯著相關(guān)。在子樣本中，嗅覺喪失與較高的血漿總tau和NfL濃度、較小的海馬和內(nèi)嗅皮層體積以及較大的腦白質(zhì)病變（WMH）體積顯著相關(guān)，并且與較低的 AD 特征皮層厚度顯著相關(guān)。
案例2：血清UCH-L1和t-tau可用于顱腦損傷患者的預(yù)后
2022年9月，Lancet Neurol（IF=59.935）發(fā)表一篇顱腦損傷預(yù)后標(biāo)志物的文章，研究者開展了一項觀察性隊列分析，即CENTER-TBI（Collaborative European Neurotrauma Effectiveness Research in Traumatic Brain Injury，歐洲神經(jīng)創(chuàng)傷治療效果合作研究—顱腦損傷）研究，以確定血清生物標(biāo)志物對于顱腦損傷后功能結(jié)局的預(yù)后意義。
CENTER-TBI研究測定了6種血清生物標(biāo)志物：S100鈣結(jié)合蛋白B [S100B]、神經(jīng)元特異性烯醇化酶[S100B]、膠質(zhì)細胞原纖維酸性蛋白[GFAP]、泛素羧基末端水解酶L1 [UCH-L1]、神經(jīng)絲蛋白輕鏈[NfL]和總tau蛋白[total-tau]（注：其中的GFAP、UCH-L1、NfL、total-tau采用Simoa技術(shù)檢測）。在4509例患者中，研究者獲得了2283例患者的血清生物標(biāo)志物數(shù)值和6個月時的擴展版格拉斯哥結(jié)局量表（GOSE，Glasgow Outcome Scale-Extended）評分。較高的6種生物標(biāo)志物水平與不良預(yù)后相關(guān)。UCH-L1和t-tau對于死亡的預(yù)測能力最高，與單獨應(yīng)用UCH-L1相比，聯(lián)合應(yīng)用GFAP和UCH-L1未能提高鑒別能力。
案例3：血清NfL蛋白水平與CAR-T細胞治療后神經(jīng)毒性的嚴(yán)重程度相關(guān)
2022年9月，圣路易斯華盛頓大學(xué)路易斯醫(yī)學(xué)院的研究團隊在JAMA Oncology（IF=33.006）上發(fā)表題為“Assessment of Pretreatment and Posttreatment Evolution of Neurofilament Light Chain Levels in Patients Who Develop Immune Effector Cell–Associated Neurotoxicity Syndrome”的研究成果，發(fā)現(xiàn)根據(jù)基線NfL水平可對患者發(fā)生免疫效應(yīng)細胞相關(guān)神經(jīng)毒性綜合征（ICANS）進行預(yù)測。
為了評估血清NfL水平與ICANS嚴(yán)重程度的相關(guān)性，研究納入2個CAR T細胞治療中心的接受CD19定向CART細胞治療的96名患者，并以22名健康年齡匹配的血清樣本作為對照，使用Simoa技術(shù)測定血清NfL蛋白水平，測量時間點為CAR-T細胞治療后ICANS達到最大值的5天前（NfL-pre）和第1天（NfL-post）。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與未發(fā)生ICANS的患者相比，出現(xiàn)ICANS患者的基線血漿NfL水平較高（87.6 pg/mL vs 29.4 pg/mL，P < 0.001）。基線NfL水平與ICANS的嚴(yán)重程度相關(guān)。根據(jù)基線NfL水平對患者發(fā)生ICANS情況進行預(yù)測，其準(zhǔn)確度高達96%。
總結(jié)與討論
Simoa（Single-molecule Array）技術(shù)的出現(xiàn)將蛋白質(zhì)檢測技術(shù)直接帶入到單分子、數(shù)字化檢測時代，它的靈敏度比ELISA提高出1000倍以上，成為fg級超低豐度蛋白質(zhì)檢測領(lǐng)域的優(yōu)勢技術(shù)?；诔叩撵`敏度，Simoa可對極少量腦脊液樣本進行檢測，可實現(xiàn)對疾病標(biāo)志物微量級別變化的準(zhǔn)確定量。另外，還能夠?qū)崿F(xiàn)外周血中神經(jīng)系統(tǒng)疾病標(biāo)志物的準(zhǔn)確檢測，改變了腦損傷和神經(jīng)退行性疾病的診斷方式，為疾病早期診斷提供了新的方法和可能。目前已發(fā)文1200多篇，其中在神經(jīng)領(lǐng)域的應(yīng)用位居第一。
在此華盈生物特別推薦Neurology 4-Plex E (N4PE) 試劑盒，可同時檢測血漿和腦脊液中的四種生物標(biāo)志物：Aβ40 、Aβ42 、GFAP和NfL，每種生物標(biāo)記物已被證明對神經(jīng)變性和腦損傷的研究具有重要意義，并可用于監(jiān)測神經(jīng)疾病藥物發(fā)現(xiàn)和開發(fā)的有效性。
華盈生物在細胞因子研究中站在客戶的角度通盤思考，建立了由固相細胞因子廣篩抗體芯片、Luminex液相細胞因子芯片、Simoa超靈敏fg級細胞因子芯片和isoPlexis單細胞細胞因子檢測技術(shù)為代表的“1+1+1+1”細胞因子系統(tǒng)篩選檢測體系，全方位解決細胞因子檢測的科學(xué)難點問題。
● 固相細胞因子廣篩抗體芯片，尤其適用于樣本數(shù)量較少，但需要進行大量細胞因子篩選和定量檢測的研究類型。
● Luminex液相細胞因子芯片，可以實現(xiàn)多種目標(biāo)細胞因子在大批量樣本中的同步檢測和準(zhǔn)確定量。
● Simoa 超低豐度細胞因子檢測技術(shù)，靈敏度比ELISA提高1000倍，成為fg級超低豐度蛋白質(zhì)檢測領(lǐng)域的優(yōu)勢技術(shù)。
● IsoPlexis單細胞細胞因子檢測技術(shù)，可捕獲蛋白細胞分泌的細胞因子，進而對細胞進行亞類分析，解決了單細胞和功能蛋白組兩個層面的研究需求。
華盈生物建立的四大細胞因子篩選和檢測平臺，可有效解決不同研究階段對細胞因子篩選和檢測的需求，為科研人員提供從蛋白質(zhì)系統(tǒng)篩選、重點檢測/驗證、早期監(jiān)控等一整套的研究方案。
相關(guān)文獻
[1] Helmrich IRAR, Czeiter E, Amrein K, et al. Incremental prognostic value of acute serum biomarkers for functional outcome after traumatic brain injury (CENTER-TBI): an observational cohort study. Lancet Neurol. 2022 Sep;21(9):792-802.
[2] Butt OH, Zhou AY, Caimi PF, et al. Assessment of Pretreatment and Posttreatment Evolution of Neurofilament Light Chain Levels in Patients Who Develop Immune Effector Cell-Associated Neurotoxicity Syndrome. JAMA Oncol. 2022 Sep 1:e223738.
[3] Dong, Y, Li, Y, Liu, K, et al. Anosmia, mild cognitive impairment, and biomarkers of brain aging in older adults. Alzheimer's Dement. 2022 Sep 15. 1- 13.返回搜狐，查看更多
