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黑豆幾丁質酶的純化及其生物學活性研究

來源：泰然健康網(wǎng) 時間：2024年12月08日 12:58

黑豆幾丁質酶的純化及其生物學活性研究

【摘要】：植物幾丁質酶是植物體中能夠水解幾丁質多聚體的一種致病性相關蛋白(Pathogenesis-related proteins),是植物體中與防御有關的一種次生水解酶。主要水解幾丁質多聚體中的β-1,4-糖苷鍵,生成N-乙酰氨基葡萄糖寡聚體或單體。大多數(shù)酶的分子量為25-40 k D,最適p H值為6,多數(shù)以單體形式存在,50℃仍很穩(wěn)定。由于其具有顯著的抗病蟲害和抗真菌活性,近年來幾丁質酶已經(jīng)成為工業(yè)、農(nóng)業(yè)、生物技術以及食品等領域研究的熱點。黑豆是眾所周知的健康食品,但是對于黑豆中幾丁質酶的研究卻很少,隨著人們對于黑豆研究的逐步加深,黑豆在食品、保健等各方面的應用會更加廣泛,對黑豆中的幾丁質酶的研究將會轉化成巨大的經(jīng)濟效益。本研究將采用先進的生化分離技術對黑豆中的一種活性物質-幾丁質酶進行提取、純化及表征,并對其生物活性進行研究。首先將黑豆粉碎后經(jīng)石油醚脫脂,40%-60%的硫酸銨分級沉淀,然后透析,經(jīng)DEAE-FF陰離子柱、SephacrylTMS-100HR凝膠柱,SDS-PAGE凝膠電泳檢驗,得到具有幾丁質酶活性的條帶,分子量約為20 k D。經(jīng)電泳純化的幾丁質酶比活力為42U/mg,純化倍數(shù)3.7倍,總回收率35%。進一步將對所得蛋白質進行最適溫度、最適p H、作用時間等理化性質表征后,進行生物學活性及抗真菌實驗的研究,為黑豆幾丁質酶的純化及應用奠定實驗基礎。